橡胶籽中β-葡萄糖苷酶分离鉴定、变性特点及结构性质的研究
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1. 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 β-葡萄糖苷酶概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 β-葡萄糖苷酶的简介 | 第10页 |
| 1.1.2 β-葡萄糖苷酶的分类与结构 | 第10-11页 |
| 1.1.3 β-葡萄糖苷酶的催化机理 | 第11-12页 |
| 1.1.4 β-葡萄糖苷酶的生化特性 | 第12-13页 |
| 1.2 β-葡萄糖苷酶纯化方法的概述 | 第13-14页 |
| 1.2.1 β-葡萄糖苷酶的纯化方法 | 第13-14页 |
| 1.2.2 β-葡萄糖苷酶的非变性电泳研究 | 第14页 |
| 1.3 尿素及盐酸胍变性β-葡萄糖苷酶的研究 | 第14-16页 |
| 1.3.1 蛋白质变性的概述 | 第14页 |
| 1.3.2 变性剂对蛋白质的影响 | 第14-15页 |
| 1.3.3 蛋白质构象的研究方法 | 第15-16页 |
| 1.4 β-葡萄糖苷酶三维结构的预测 | 第16-19页 |
| 1.4.1 蛋白质结构的预测方法 | 第16-17页 |
| 1.4.2 同源建模的基本原理 | 第17-18页 |
| 1.4.3 同源建模的一般步骤 | 第18页 |
| 1.4.4 β-葡萄糖苷酶模型的评价 | 第18-19页 |
| 1.5 β-葡萄糖苷酶与底物的分子对接模拟 | 第19-20页 |
| 1.5.1 分子对接技术的原理 | 第19页 |
| 1.5.2 分子对接技术的应用 | 第19-20页 |
| 1.6 本论文主要的研究内容 | 第20-21页 |
| 1.6.1 β-葡萄糖苷酶的纯化及性质研究 | 第20页 |
| 1.6.2 变性剂对β-葡萄糖苷酶的影响 | 第20-21页 |
| 1.6.3 β-葡萄糖苷酶的同源建模及优化评估 | 第21页 |
| 1.6.4 β-葡萄糖苷酶与底物的分子对接研究 | 第21页 |
| 1.7 本论文研究的意义 | 第21-22页 |
| 2. 材料与方法 | 第22-28页 |
| 2.1 实验材料与仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 β-葡萄糖苷酶的制备 | 第23页 |
| 2.2.2 β-葡萄糖苷酶的活力测定 | 第23-24页 |
| 2.2.3 橡胶籽蛋白的Osborn分类 | 第24页 |
| 2.2.4 β-葡萄糖苷酶的等电点沉淀 | 第24页 |
| 2.2.5 β-葡萄糖苷酶的葡聚糖凝胶层析 | 第24-25页 |
| 2.2.6 非变性电泳法测量分子量 | 第25页 |
| 2.2.7 变性剂对β-葡萄糖苷酶的影响 | 第25页 |
| 2.2.8 β-葡萄糖苷酶的激光纳米粒径分析 | 第25页 |
| 2.2.9 β-葡萄糖苷酶的内源性荧光光谱分析 | 第25-26页 |
| 2.2.10 β-葡萄糖苷酶的质谱鉴定 | 第26页 |
| 2.2.11 β-葡萄糖苷酶的同源建模 | 第26页 |
| 2.2.12 β-葡萄糖苷酶模型的评价 | 第26-27页 |
| 2.2.13 β-葡萄糖苷酶与底物的分子对接 | 第27-28页 |
| 3. 结果与分析 | 第28-48页 |
| 3.1 橡胶籽蛋白中各组分分析 | 第28页 |
| 3.2 β-葡萄糖苷酶的纯化及分子量测定 | 第28-32页 |
| 3.2.1 等电点沉淀法纯化结果 | 第28-29页 |
| 3.2.2 葡聚糖凝胶层析法纯化结果 | 第29-30页 |
| 3.2.3 非变性电泳对酶分子量的测定 | 第30-32页 |
| 3.2.4 β-葡萄糖苷酶的纯化过程分析 | 第32页 |
| 3.3 尿素及盐酸胍对β-葡萄糖苷酶的影响 | 第32-37页 |
| 3.3.1 变性剂浓度及温度对酶活性的影响 | 第32-34页 |
| 3.3.2 变性剂浓度及时间对酶活性的影响 | 第34页 |
| 3.3.3 β-葡萄糖苷酶的粒径分析 | 第34-35页 |
| 3.3.4 β-葡萄糖苷酶的内源性荧光光谱分析 | 第35-36页 |
| 3.3.6 β-葡萄糖苷酶的蛋白展开变化 | 第36-37页 |
| 3.4 β-葡萄糖苷酶的质谱分析及序列对比 | 第37-40页 |
| 3.4.1 β-葡萄糖苷酶的质谱分析 | 第37-39页 |
| 3.4.2 β-葡萄糖苷酶的序列对比 | 第39-40页 |
| 3.5 β-葡萄糖苷酶的三维结构建模 | 第40-44页 |
| 3.5.1 β-葡萄糖苷酶的同源建模 | 第40-42页 |
| 3.5.2 β-葡萄糖苷酶模型的评价 | 第42-44页 |
| 3.6 β-葡萄糖苷酶与底物的分子对接分析 | 第44-48页 |
| 3.6.1 β-葡萄糖苷酶的底物筛选分析 | 第44-45页 |
| 3.6.2 底物分子对接的空间特征分析 | 第45-48页 |
| 4. 讨论 | 第48-49页 |
| 4.1 β-葡萄糖苷酶的最优纯化方案的讨论 | 第48页 |
| 4.2 β-葡萄糖苷酶的多聚体结构及分子量的讨论 | 第48页 |
| 4.3 β-葡萄糖苷酶在变性条件下结构变化的讨论 | 第48-49页 |
| 5. 结论 | 第49-51页 |
| 5.1 β-葡萄糖苷酶的纯化及质谱鉴定 | 第49页 |
| 5.2 变性剂对β-葡萄糖苷酶活性及结构的影响 | 第49页 |
| 5.3 β-葡萄糖苷酶的同源建模及评价 | 第49-50页 |
| 5.4 β-葡萄糖苷酶与底物的分子对接 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
