| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-26页 |
| ·丙酮酸简介 | 第9页 |
| ·丙酮酸(盐)及其衍生物的应用 | 第9-10页 |
| ·在化工制药领域 | 第9页 |
| ·在食品保健领域 | 第9-10页 |
| ·其他方面的应用 | 第10页 |
| ·丙酮酸(盐)的生产方法 | 第10-12页 |
| ·化学催化合成法 | 第10页 |
| ·生物催化法 | 第10-11页 |
| ·微生物发酵法 | 第11-12页 |
| ·发酵法生产丙酮酸研究现状及发展趋势 | 第12-14页 |
| ·酿酒酵母代谢 | 第14-23页 |
| ·酿酒酵母 | 第14-15页 |
| ·酿酒酵母菌株改造 | 第15-16页 |
| ·酿酒酵母的葡萄糖代谢 | 第16-19页 |
| ·酿酒酵母的丙酮酸代谢 | 第19-22页 |
| ·调节丙酮酸代谢节点上的代谢流量 | 第22-23页 |
| ·酿酒酵母生产丙酮酸可行性分析 | 第23页 |
| ·基因敲除 | 第23-24页 |
| ·本课题立题依据及研究内容 | 第24-26页 |
| ·立题依据 | 第24页 |
| ·主要研究内容 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-38页 |
| ·实验材料 | 第26-30页 |
| ·菌种和质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器和设备 | 第27-28页 |
| ·培养基和溶液 | 第28-30页 |
| ·分析方法 | 第30页 |
| ·酿酒酵母细胞浓度测定 | 第30页 |
| ·丙酮酸含量测定 | 第30页 |
| ·葡萄糖浓度测定 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-38页 |
| ·酿酒酵母生长曲线的绘制 | 第30页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第30页 |
| ·质粒NotⅠ酶切 | 第30-31页 |
| ·酶切片段回收 | 第31页 |
| ·酿酒酵母的转化 | 第31-32页 |
| ·酿酒酵母基因组提取 | 第32页 |
| ·酿酒酵母丙酮酸脱羧酶活性测定 | 第32页 |
| ·Southern blot | 第32-33页 |
| ·引物合成和PCR扩增 | 第33-37页 |
| ·酿酒酵母的培养方法 | 第37-38页 |
| 3 结果与讨论 | 第38-61页 |
| ·酿酒酵母Y2的pdc1基因的敲除 | 第38-40页 |
| ·酿酒酵母Y2生长曲线的测定 | 第38页 |
| ·电击穿孔法转化酿酒酵母Y2 | 第38-39页 |
| ·酿酒酵母转化子Y2-1的筛选与鉴定 | 第39-40页 |
| ·转化子遗传稳定性 | 第40页 |
| ·酿酒酵母Y2-1的pdc5基因的敲除 | 第40-43页 |
| ·醋酸锂转化法转化酿酒酵母Y2-1 | 第40-41页 |
| ·酿酒酵母转化子Y2-15的筛选和验证 | 第41-42页 |
| ·转化子遗传稳定性 | 第42-43页 |
| ·酿酒酵母丙酮酸脱羧酶活力测定 | 第43-44页 |
| ·蛋白质浓度标准曲线 | 第43-44页 |
| ·酿酒酵母Y2,Y2-1,和Y2-15丙酮酸脱羧酶活性比较 | 第44页 |
| ·Southern blot验证酿酒酵母基因敲除菌株 | 第44-46页 |
| ·酿酒酵母基因组酶切 | 第44-45页 |
| ·探针的标记 | 第45页 |
| ·杂交和检测 | 第45-46页 |
| ·酿酒酵母发酵产酸实验 | 第46-49页 |
| ·丙酮酸测定 | 第46-48页 |
| ·摇瓶产酸实验 | 第48-49页 |
| ·酿酒酵母Y2-15丙酮酸发酵的优化 | 第49-61页 |
| ·Y2-15生长曲线的绘制 | 第49-50页 |
| ·种子培养基的优化 | 第50-51页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第51-57页 |
| ·发酵条件的优化 | 第57-61页 |
| 4 结论 | 第61-62页 |
| 5 展望 | 第62-63页 |
| 6 参考文献 | 第63-70页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第70-71页 |
| 8 致谢 | 第71页 |