| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第15-26页 |
| 1.1 黑曲霉及果胶酶研究进展 | 第15-20页 |
| 1.1.1 黑曲霉简介 | 第15页 |
| 1.1.2 果胶酶的结构及分类 | 第15-17页 |
| 1.1.3 果胶酶的理化性质及序列特征 | 第17-18页 |
| 1.1.4 果胶酶的表达调控 | 第18页 |
| 1.1.5 果胶酶与真菌致病性的关系 | 第18-19页 |
| 1.1.6 果胶酶的应用及生产 | 第19-20页 |
| 1.2 黑曲霉多聚半乳糖醛酸酶基因pgxB生物学信息 | 第20-22页 |
| 1.2.1 黑曲霉pgxB理化性质分析 | 第20-21页 |
| 1.2.2 黑曲霉pgxB序列分析 | 第21-22页 |
| 1.2.3 外切多聚半乳糖醛酸酶基因氨基酸序列保守域分析 | 第22页 |
| 1.3 真菌基因敲除研究进展 | 第22-25页 |
| 1.3.1 分子生物学技术 | 第22-24页 |
| 1.3.2 真菌转化的筛选标记 | 第24-25页 |
| 1.4 课题研究的目的、意义和内容 | 第25-26页 |
| 1.4.1 研究的目的与意义 | 第25页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 黑曲霉pgxB缺失菌株的构建及其致病性分析 | 第26-47页 |
| 2.1 实验材料、仪器及设备 | 第26-27页 |
| 2.1.1 材料 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 黑曲霉pgxB敲除载体的构建 | 第27-31页 |
| 2.2.2 黑曲霉原生质体制备及PEG转化 | 第31页 |
| 2.2.3 黑曲霉pgxB基因敲除菌株的筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.4 多聚半乳糖醛酸酶活性检测 | 第32-33页 |
| 2.2.5 果胶裂解酶活性检测 | 第33页 |
| 2.2.6 黑曲霉对采后果实侵染能力检测 | 第33-34页 |
| 2.2.7 果胶酶基因表达水平分析 | 第34-35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-46页 |
| 2.3.1 pgxB上下游片段的合成及纯化 | 第35-36页 |
| 2.3.2 pgxB片段与T载体的连接及鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.3 质粒T-ABCD和pC3的酶切及纯化 | 第37-38页 |
| 2.3.4 pgxB片段与pC3的连接及鉴定 | 第38页 |
| 2.3.5 黑曲霉pgxB缺失菌株的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.6 pme A、An04g09690敲除载体的构建 | 第39-42页 |
| 2.3.7 野生型与 ΔpgxB的PG活性比较 | 第42-43页 |
| 2.3.8 野生型与 ΔpgxB的PL活性比较 | 第43页 |
| 2.3.9 野生型与 ΔpgxB致病性分析 | 第43-46页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第46-47页 |
| 第三章 环境因素对黑曲霉产果胶酶及生长的影响研究 | 第47-61页 |
| 3.1 实验材料、仪器与设备 | 第47页 |
| 3.1.1 材料 | 第47页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 3.1.3 主要设备 | 第47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 3.2.1 不同碳源对果胶酶的诱导 | 第47-48页 |
| 3.2.2 黑曲霉菌落生长及生长曲线测定 | 第48页 |
| 3.2.3 果胶酶基因表达水平分析 | 第48页 |
| 3.2.4 黑曲霉 ΔpgxB对重金属胁迫的敏感性测定 | 第48-49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-59页 |
| 3.3.1 不同碳源对果胶酶的诱导 | 第49-50页 |
| 3.3.2 野生型与 ΔpgxB在不同培养基上的生长比较 | 第50-51页 |
| 3.3.3 果胶诱导果胶酶编码基因的表达 | 第51-52页 |
| 3.3.4 野生型与 ΔpgxB对重金属胁迫的敏感性分析 | 第52-57页 |
| 3.3.5 培养时间、不同浓度柠檬酸和不同初始p H和对黑曲霉产PG的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.6 黑曲霉多聚半乳糖醛酸酶酶学性质分析 | 第58-59页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附录 外切 PG 基因氨基酸保守域分析 | 第69-73页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第73-74页 |
