| 摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-13页 |
| 中英文缩略表 | 第13-15页 |
| 引言 | 第15-27页 |
| 第一章 免疫抗原的制备 | 第27-53页 |
| 第一节 副溶血性弧菌三种主要溶血毒素原核表达载体的构建 | 第28-40页 |
| 1 材料与方法 | 第28-35页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·载体 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·试剂配制 | 第29-30页 |
| ·培养基配制 | 第30页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·溶血基因扩增 | 第31页 |
| ·克隆载体构建 | 第31页 |
| ·表达载体构建 | 第31-32页 |
| ·诱导表达 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第33-34页 |
| ·表达产物的免疫印迹（Western-blotting）分析 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-37页 |
| ·溶血基因扩增结果 | 第35页 |
| ·克隆载体鉴定 | 第35页 |
| ·表达载体鉴定 | 第35-37页 |
| ·诱导表达及表达产物的鉴定 | 第37页 |
| 3 小结与讨论 | 第37-39页 |
| 附录一 | 第39-40页 |
| 第二节 三种溶血毒素重组蛋白的表达与分离纯化 | 第40-51页 |
| 1 材料与方法 | 第40-46页 |
| ·材料 | 第40-42页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·试剂配制 | 第40-42页 |
| ·培养基配方 | 第42页 |
| ·TDH 重组蛋白的可溶性表达分析 | 第42页 |
| ·表达条件优化 | 第42页 |
| ·包涵体中粗提TDH 重组蛋白 | 第42-43页 |
| ·TDH 重组蛋白纯化 | 第43-44页 |
| ·亲和层析法纯化TDH 重组蛋白 | 第43-44页 |
| ·割胶回收法纯化TDH 重组蛋白 | 第44页 |
| ·TDH 重组蛋白复性 | 第44-45页 |
| ·溶血活性检测 | 第45页 |
| ·免疫原性分析 | 第45-46页 |
| ·ELISA 检测法 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-49页 |
| ·表达条件优化结果 | 第46页 |
| ·亲和层析法和割胶回收法纯化效果比较 | 第46-48页 |
| ·复性样品溶血活性检测结果 | 第48页 |
| ·免疫原性分析结果 | 第48-49页 |
| 3 小结与讨论 | 第49-51页 |
| 第三节 菌体抗原的制备 | 第51-53页 |
| 1 材料与方法 | 第51-52页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·实验菌株 | 第51页 |
| ·菌体准备 | 第51页 |
| ·紫外灭活 | 第51页 |
| ·灭活率检测 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52页 |
| ·灭活率检测结果 | 第52页 |
| 3 小结与讨论 | 第52-53页 |
| 第二章 副溶血性弧菌特异性抗体的制备 | 第53-69页 |
| 第一节 TLH、TDH 重组表达蛋白特异性单抗的制备及其免疫学特性分析 | 第54-64页 |
| 1 材料与方法 | 第54-60页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·主要试剂耗材 | 第54页 |
| ·试剂配制 | 第54-55页 |
| ·小鼠免疫 | 第55页 |
| ·抗体杂交瘤细胞株的建立 | 第55-57页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备 | 第55-56页 |
| ·免疫小鼠脾细胞的制备 | 第56页 |
| ·细胞融合 | 第56页 |
| ·阳性杂交瘤细胞克隆的筛选 | 第56-57页 |
| ·细胞冻存 | 第57-58页 |
| ·抗体亚类鉴定 | 第58页 |
| ·抗体特异性表征 | 第58页 |
| ·抗体大量制备与纯化 | 第58-60页 |
| ·小鼠腹水制备与收集 | 第58-59页 |
| ·腹水纯化 | 第59页 |
| ·PD-10 脱盐柱的使用方法 | 第59-60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-63页 |
| ·小鼠免疫血清效价检测结果 | 第60页 |
| ·抗体杂交瘤细胞株的建立 | 第60-61页 |
| ·细胞融合结果 | 第60页 |
| ·阳性细胞株筛选结果 | 第60-61页 |
| ·抗体亚类鉴定结果 | 第61页 |
| ·TDH-AC12 与TLH-BD2 抗体的特异性 | 第61-63页 |
| ·抗体纯化结果 | 第63页 |
| 3 小结与讨论 | 第63-64页 |
| 第二节 副溶血性弧菌多克隆抗体制备及其特异性免疫学特性分析 | 第64-69页 |
| 1 材料与方法 | 第64-67页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第64-65页 |
| ·试剂配制 | 第65页 |
| ·实验菌株 | 第65页 |
| ·动物饲养 | 第65页 |
| ·免疫方式 | 第65-66页 |
| ·取血 | 第66页 |
| ·抗体纯化 | 第66-67页 |
| ·抗体特异性检测 | 第67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-68页 |
| ·多抗特异性检测结果 | 第67-68页 |
| 3 小结与讨论 | 第68-69页 |
| 第三章 抗体的应用可行性初步探讨 | 第69-81页 |
| 第一节 TLH 特异性单抗的应用可行性初步探讨 | 第69-73页 |
| 1 材料与方法 | 第69-72页 |
| ·材料 | 第69-70页 |
| ·主要试剂与材料 | 第69-70页 |
| ·试剂配制 | 第70页 |
| ·免疫磁珠制备 | 第70-71页 |
| ·免疫层析试纸条制备 | 第71页 |
| ·样品垫处理 | 第71页 |
| ·硝化纤维膜上抗体的喷涂 | 第71页 |
| ·试纸条组装 | 第71页 |
| ·试纸条非特异性检测 | 第71页 |
| ·免疫层析试纸条（竞争法）定量分析重组TLH 蛋白的探讨 | 第71-72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-73页 |
| ·试纸条非特异性检测结果 | 第72页 |
| ·免疫层析试纸条定量重组TLH 蛋白的可行性分析 | 第72-73页 |
| 3 小结与讨论 | 第73页 |
| 第二节 副溶血性弧菌多克隆抗体的应用可行性初步探讨 | 第73-81页 |
| 1 材料与方法 | 第74-77页 |
| ·材料 | 第74页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第74页 |
| ·试剂配制 | 第74页 |
| ·菌株 | 第74页 |
| ·免疫磁珠制备 | 第74-75页 |
| ·免疫磁分离-PCR 联用鉴定样品中副溶血性弧菌 | 第75-77页 |
| ·从含纯培养Vp 的海水样品中富集鉴定副溶血性弧菌 | 第75-76页 |
| ·含混合菌的海水样品中富集鉴定副溶血性弧菌 | 第76-77页 |
| ·虾样品中富集鉴定副溶血性弧菌 | 第77页 |
| 2 结果与分析 | 第77-79页 |
| ·含纯培养Vp 海水样品的富集鉴定结果 | 第77-78页 |
| ·混合菌的海水样品的富集鉴定结果 | 第78-79页 |
| ·虾样品的富集鉴定结果 | 第79页 |
| 3 小结与讨论 | 第79-81页 |
| 全文总结与讨论 | 第81-83页 |
| 1 总结 | 第81页 |
| 2 讨论 | 第81-83页 |
| ·重组蛋白融合标签 | 第81页 |
| ·割胶回收法的补充探讨 | 第81页 |
| ·关于省略细胞融合后克隆筛选的探讨 | 第81-82页 |
| ·检测方法的联用 | 第82-83页 |
| 展望 | 第83-84页 |
| 本论文创新点 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
