| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 缩略语表 | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 食源性致病菌概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 克罗诺杆菌 | 第10-11页 |
| 1.1.2 单核增生李斯特菌 | 第11-12页 |
| 1.2 食源性致病菌检测方法的研究进展 | 第12-19页 |
| 1.2.1 传统分离鉴定法 | 第12页 |
| 1.2.2 显色培养基鉴定技术 | 第12-13页 |
| 1.2.3 分子生物学检测方法 | 第13-16页 |
| 1.2.4 生物传感器 | 第16页 |
| 1.2.5 免疫学检测方法 | 第16-19页 |
| 1.3 研究的目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 抗克罗诺杆菌单克隆抗体的制备 | 第21-37页 |
| 前言 | 第21页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌株、细胞株、实验动物 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要材料与试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.4 相关试剂的配制 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 菌株培养 | 第23页 |
| 2.2.2 免疫原制备 | 第23-24页 |
| 2.2.3 单克隆抗体制备 | 第24-28页 |
| 2.2.4 单克隆抗体评价 | 第28-29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-36页 |
| 2.3.1 封闭剂种类的选择 | 第29-30页 |
| 2.3.2 小鼠血清效价测定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 阳性细胞的筛选 | 第31-32页 |
| 2.3.4 单克隆抗体浓度测定 | 第32-33页 |
| 2.3.5 单克隆抗体的特异性(Dot-Blot) | 第33页 |
| 2.3.6 单克隆抗体的效价 | 第33-35页 |
| 2.3.7 腹水Western-blot分析 | 第35-36页 |
| 2.4 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 10mL体系两步法磁分离结合PCR检测牛奶中的单核增生李斯特菌 | 第37-52页 |
| 前言 | 第37-38页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第38-39页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第38页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第38页 |
| 3.1.3 相关试剂的配制 | 第38-39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-46页 |
| 3.2.1 菌株培养 | 第39页 |
| 3.2.2 链霉亲和素(SA)与磁珠(MB)偶联 | 第39-40页 |
| 3.2.3 10 mL体系两步法磁分离条件优化 | 第40-41页 |
| 3.2.4 优化PCR条件 | 第41-46页 |
| 3.2.5 10 mL大体系两步法磁分离结合PCR检测纯溶液中的单核增生李斯特菌 | 第46页 |
| 3.2.6 10 mL大体系两步法磁分离结合PCR检测牛奶中的单核增生李斯特菌 | 第46页 |
| 3.3 实验结果 | 第46-51页 |
| 3.3.1 优化生物素标记抗体(Biotin-mAb)的比例 | 第46-47页 |
| 3.3.2 磁分离条件优化 | 第47页 |
| 3.3.3 特异性 | 第47-48页 |
| 3.3.4 PCR条件优化 | 第48-49页 |
| 3.3.5 10 mL大体系两步法磁分离结合PCR检测纯溶液中的单核增生李斯特菌 | 第49-50页 |
| 3.3.6 10 mL大体系两步法磁分离结合PCR检测牛奶中的单核增生李斯特菌 | 第50-51页 |
| 3.4 小结 | 第51-52页 |
| 第四章 基于大体系下(50mL)纳米免疫磁珠高效富集单核增生李斯特菌的方法学研究 | 第52-56页 |
| 前言 | 第52页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第52-53页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第52页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第52页 |
| 4.1.3 相关试剂配制 | 第52-53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-54页 |
| 4.2.1 菌株培养 | 第53页 |
| 4.2.2 链霉亲和素(SA)与磁珠(MB)偶联 | 第53页 |
| 4.2.3 50 mL体系两步法磁分离条件优化 | 第53-54页 |
| 4.3 实验结果 | 第54-55页 |
| 4.3.1 抗体用量优化 | 第54页 |
| 4.3.2 SA-MB用量优化 | 第54-55页 |
| 4.4 小结 | 第55-56页 |
| 第五章 结论与展望 | 第56-58页 |
| 5.1 结论 | 第56-57页 |
| 5.1.1 制备了抗克罗诺杆菌单克隆抗体 | 第56页 |
| 5.1.2 10 mL体系两步法磁分离结合PCR可以检测牛奶中的单核增生李斯特菌 | 第56页 |
| 5.1.3 基于大体系下(50mL)纳米免疫磁珠可以高效富集单核增生李斯特菌 | 第56-57页 |
| 5.2 展望 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录A 主要菌株 | 第66-68页 |
| 附录B 设备仪器 | 第68-69页 |
| 个人简介 | 第69页 |
| 攻读学位期间研究成果 | 第69-70页 |
| 彩图 | 第70-71页 |
