| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第18-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-31页 |
| 1.1 引言 | 第19页 |
| 1.2 β-胡萝卜素简介 | 第19-20页 |
| 1.2.1 β-胡萝卜素的结构及性质 | 第19-20页 |
| 1.2.2 β-胡萝卜素的应用 | 第20页 |
| 1.3 酿酒酵母中的甲羟戊酸途径 | 第20-23页 |
| 1.3.1 途径介绍 | 第20-22页 |
| 1.3.2 关键酶及其调控 | 第22-23页 |
| 1.4 麦角固醇抑制剂酮康唑 | 第23-25页 |
| 1.4.1 酮康唑简介 | 第23页 |
| 1.4.2 酮康唑的结构及理化性质 | 第23-24页 |
| 1.4.3 酮康唑的作用机理 | 第24-25页 |
| 1.5 FMDV 2A | 第25-27页 |
| 1.5.1 FMDV 2A的机制 | 第25-26页 |
| 1.5.2 2A多肽的分类 | 第26-27页 |
| 1.5.3 FMDV 2A的应用 | 第27页 |
| 1.6 β-胡萝卜素生产的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.7 本课题研究内容 | 第28-31页 |
| 第二章 酮康唑的添加对酿酒酵母生产β-胡萝卜素的影响 | 第31-43页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 实验材料 | 第31-32页 |
| 2.2.1 菌株 | 第31页 |
| 2.2.2 培养基 | 第31-32页 |
| 2.2.3 实验仪器与试剂 | 第32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-34页 |
| 2.3.1 菌株培养方法 | 第32-33页 |
| 2.3.2 麦角固醇的提取与检测 | 第33页 |
| 2.3.3 β-胡萝卜素的提取与检测 | 第33-34页 |
| 2.3.4 酮康唑添加实验 | 第34页 |
| 2.4 实验结果分析 | 第34-41页 |
| 2.4.1 重组菌的发酵 | 第34-35页 |
| 2.4.2 麦角固醇标准曲线 | 第35页 |
| 2.4.3 β-胡萝卜素标准曲线 | 第35-36页 |
| 2.4.4 实验1 | 第36-38页 |
| 2.4.5 实验2 | 第38-40页 |
| 2.4.6 实验3 | 第40-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-43页 |
| 第三章 利用FMDV 2A体系在酿酒酵母中构建β-胡萝卜素合成途径 | 第43-61页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 实验材料 | 第43-45页 |
| 3.2.1 载体 | 第43-44页 |
| 3.2.2 培养基 | 第44页 |
| 3.2.3 实验仪器及试剂 | 第44-45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-53页 |
| 3.3.1 引物设计 | 第45页 |
| 3.3.2 质粒提取 | 第45-46页 |
| 3.3.3 PCR反应 | 第46-47页 |
| 3.3.4 胶回收 | 第47页 |
| 3.3.5 酶切 | 第47-48页 |
| 3.3.6 柱回收 | 第48页 |
| 3.3.7 连接体系 | 第48-49页 |
| 3.3.8 大肠杆菌化学法转化 | 第49页 |
| 3.3.9 阳性克隆筛选 | 第49-50页 |
| 3.3.10 重组质粒的构建 | 第50-52页 |
| 3.3.11 酿酒酵母的化学法转化 | 第52页 |
| 3.3.12 酵母质粒的提取 | 第52-53页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第53-59页 |
| 3.4.1 构建重组质粒2A-pYBIE及2A-pBYIE | 第53-55页 |
| 3.4.2 构建重组质粒2A-pYBIG及2A-pBYIG | 第55-57页 |
| 3.4.3 酿酒酵母的转化 | 第57-59页 |
| 3.4.4 酵母质粒提取验证 | 第59页 |
| 3.5 本章小结 | 第59-61页 |
| 第四章 优化FMDV 2A序列并在酿酒酵母中构建β-胡萝卜素合成途径 | 第61-83页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 实验材料 | 第61-62页 |
| 4.2.1 载体 | 第61页 |
| 4.2.2 培养基 | 第61-62页 |
| 4.2.3 实验仪器和设备 | 第62页 |
| 4.3 实验方法 | 第62-70页 |
| 4.3.1 引物设计 | 第62-65页 |
| 4.3.2 质粒提取 | 第65页 |
| 4.3.3 PCR反应 | 第65页 |
| 4.3.4 胶回收 | 第65-66页 |
| 4.3.5 酶切反应 | 第66页 |
| 4.3.6 柱回收 | 第66页 |
| 4.3.7 连接 | 第66页 |
| 4.3.8 大肠杆菌化学转化 | 第66页 |
| 4.3.9 阳性克隆的筛选 | 第66-67页 |
| 4.3.10 重组质粒的构建 | 第67-70页 |
| 4.3.11 酿酒酵母的转化 | 第70页 |
| 4.3.12 酿酒酵母的质粒提取 | 第70页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第70-80页 |
| 4.4.1 构建重组质粒p-YBIE(2A) | 第70-72页 |
| 4.4.2 构建重组质粒p-IE-YB(2A) | 第72-73页 |
| 4.4.3 构建重组质粒pYES2-t-2A | 第73页 |
| 4.4.4 构建重组质粒pRS425-t-2A-i | 第73-75页 |
| 4.4.5 构建重组质粒p-ABG(2A) | 第75-78页 |
| 4.4.6 酿酒酵母的转化 | 第78-80页 |
| 4.5 本章小结 | 第80-83页 |
| 第五章 利用2A体系构建重组菌的发酵及发酵条件的优化 | 第83-93页 |
| 5.1 引言 | 第83页 |
| 5.2 不同种类培养基的比较 | 第83-85页 |
| 5.2.1 发酵菌株 | 第83-84页 |
| 5.2.2 菌体的培养和发酵 | 第84页 |
| 5.2.3 菌体浓度的测定 | 第84页 |
| 5.2.4 菌体干重的测定 | 第84-85页 |
| 5.2.5 β-胡萝卜素的提取和检测 | 第85页 |
| 5.3 不同诱导时间的比较 | 第85-86页 |
| 5.3.1 发酵菌株 | 第85-86页 |
| 5.3.2 菌体的培养和发酵 | 第86页 |
| 5.3.3 菌体浓度的测定 | 第86页 |
| 5.3.4 菌体干重的测定 | 第86页 |
| 5.3.5 β-胡萝卜素的提取和测定 | 第86页 |
| 5.4 不同菌株的比较 | 第86-87页 |
| 5.4.1 发酵菌株 | 第86页 |
| 5.4.2 菌体的培养和发酵 | 第86-87页 |
| 5.4.3 菌体浓度的测定 | 第87页 |
| 5.4.4 菌体干重的测定 | 第87页 |
| 5.4.5 β-胡萝卜素的提取和测定 | 第87页 |
| 5.5 实验结果与讨论 | 第87-91页 |
| 5.5.1 不同培养基的比较 | 第87-89页 |
| 5.5.2 不同诱导时间的比较 | 第89-91页 |
| 5.5.3 不同菌株的比较 | 第91页 |
| 5.6 本章小结 | 第91-93页 |
| 第六章 结论与展望 | 第93-95页 |
| 6.1 结论 | 第93-94页 |
| 6.2 展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-101页 |
| 附录 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103-105页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第105-107页 |
| 作者和导师简介 | 第107-108页 |
| 附件 | 第108-109页 |
