| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-21页 |
| ·D-苯丙氨酸概述 | 第9页 |
| ·D-苯丙氨酸的用途 | 第9-10页 |
| ·D-苯丙氨酸生产方法 | 第10-15页 |
| ·对映体拆分法 | 第10-11页 |
| ·不对称合成法 | 第11-12页 |
| ·生物法 | 第12-15页 |
| ·E. coli中D-苯丙氨酸生物合成途径 | 第15-18页 |
| ·D-氨基酸转氨酶 | 第18-19页 |
| ·立题依据及主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-37页 |
| ·实验材料 | 第21-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第21-23页 |
| ·引物 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·工具酶与试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-37页 |
| ·常规分子操作 | 第26页 |
| ·芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·E. coli JM109 感受态细胞的制备及转化 | 第26-27页 |
| ·E. coli电转化感受态细胞的制备及电转化 | 第27页 |
| ·E. coli W14 突变工程菌的构建 | 第27-29页 |
| ·不同来源D-氨基酸转氨酶基因dat的克隆 | 第29页 |
| ·重组菌E. coli BL21(DE3) (pETdat)的构建 | 第29-31页 |
| ·重组菌E. coli BL21(DE3) (pETdat)的诱导表达 | 第31页 |
| ·Dat酶活力测定 | 第31-32页 |
| ·蛋白纯化 | 第32页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第32页 |
| ·D-氨基酸转氨酶催化特性分析 | 第32页 |
| ·重组菌E. coli BCEA (pR15ABKpRdat)的构建 | 第32-35页 |
| ·重组质粒pR15ABKApRdat及重组工程菌的构建 | 第35-36页 |
| ·重组工程菌发酵实验 | 第36页 |
| ·细胞干重、D-苯丙氨酸浓度、副产物浓度测定以及DL-苯丙氨酸的分离 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第37-56页 |
| ·E. coli W14 突变工程菌的构建 | 第37页 |
| ·E. coli W14 突变工程菌生长状态测定 | 第37-39页 |
| ·重组菌E. coli BL21(DE3) (pETdat)的构建及DatBS催化特性分析 | 第39-42页 |
| ·重组菌E. coli BL21(DE3) (pETdatBS)的构建 | 第39页 |
| ·DatBS的诱导表达及分离纯化 | 第39-40页 |
| ·DatBS的催化特性分析 | 第40-42页 |
| ·重组菌E. coli BL21(DE3) (pETdatBL)的构建及DatBL的催化特性分析 | 第42-45页 |
| ·重组菌E. coli BL21(DE3) (pETdatBL)的构建 | 第42页 |
| ·DatBL的诱导表达及分离纯化 | 第42-43页 |
| ·DatBL的催化特性分析 | 第43-45页 |
| ·重组菌E. coli BL21(DE3) (pETdatBA)的构建 | 第45-47页 |
| ·重组菌E. coli BL21(DE3) (pETdatBA)的构建 | 第45页 |
| ·DatBA的诱导表达及分离纯化 | 第45-46页 |
| ·DatBA的催化特性分析 | 第46-47页 |
| ·D-氨基酸转氨酶的产物构型鉴定及功能验证 | 第47-48页 |
| ·不同来源的D-氨基酸转氨酶催化特性比较 | 第48-49页 |
| ·重组菌E.coli BCEA (pR15ABKpRdat)的构建 | 第49-50页 |
| ·重组菌E.coli BCEA (pR15ABKpRdat)发酵试验 | 第50-51页 |
| ·重组菌E.coli BCEA (pR15ABKApRdat)的构建 | 第51-52页 |
| ·重组菌E. coli BCEA (pR15ABKApRdat)发酵试验 | 第52页 |
| ·不同宿主菌对D-苯丙氨酸合成的影响 | 第52-53页 |
| ·重组菌E. coli BCEA (pR15ABKApRdatBS)补料分批发酵实验 | 第53-54页 |
| ·D-苯丙氨酸对菌体生长的影响 | 第54-56页 |
| 主要结论与展望 | 第56-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第64页 |
