| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| ·概述 | 第8-9页 |
| ·硫酸软骨素的理化性质与应用 | 第8页 |
| ·硫酸软骨素的生产方法 | 第8-9页 |
| ·国内外研究进展 | 第9-15页 |
| ·微生物法生产硫酸软骨素 | 第9-10页 |
| ·大肠杆菌 K4 荚膜多糖合成基因簇 | 第10-12页 |
| ·大肠杆菌 K4 合成果糖软骨素的代谢途径 | 第12-13页 |
| ·Group 2 荚膜多糖合成基因簇的转录调控 | 第13-14页 |
| ·大肠杆菌 K4 发酵生产 K4CPS 的研究进展 | 第14-15页 |
| ·本论文研究目的与意义 | 第15-16页 |
| ·本论文研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-25页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·菌株与质粒 | 第17-18页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| ·仪器 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·培养方法 | 第19页 |
| ·基因表达菌株的构建 | 第19-21页 |
| ·目的基因的扩增与重组质粒的构建 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌电击感受态的制备 | 第20页 |
| ·重组表达载体的电击转化与筛选 | 第20页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第20-21页 |
| ·Red 同源重组技术 | 第21-22页 |
| ·重组引物设计与敲除框的构建 | 第21-22页 |
| ·重组大肠杆菌电击感受态的制备 | 第22页 |
| ·目的片段 DNA 的电击转化与筛选 | 第22页 |
| ·荧光定量 PCR | 第22-23页 |
| ·总 RNA 的提取与 cDNA 的获得 | 第22页 |
| ·定量目的基因和内参基因的筛选 | 第22-23页 |
| ·荧光定量 PCR | 第23页 |
| ·K4CPS 多糖的提取 | 第23-24页 |
| ·测定方法 | 第24-25页 |
| ·生物量的测定 | 第24页 |
| ·K4CPS 的测定 | 第24页 |
| ·甘油和乙酸的测定 | 第24页 |
| ·K4CPS 多糖分子量的测定 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-42页 |
| ·kfoA 和 kfoC 基因过量表达对 K4CPS 合成的影响 | 第25-29页 |
| ·kfoA 和 kfoC 基因的克隆 | 第25页 |
| ·kfoA 和 kfoC 基因共表达载体和重组菌的构建 | 第25-27页 |
| ·KfoA 与 KfoC 蛋白在大肠杆菌 K4 中的过量表达分析 | 第27-28页 |
| ·kfoA 与 kfoC 基因共表达对 K4CPS 合成的影响 | 第28页 |
| ·kfoA 与 kfoC 基因共表达对 K4CPS 分子量的影响 | 第28-29页 |
| ·转录调控蛋白 SlyA 对 K4CPS 合成基因簇表达的影响 | 第29-37页 |
| ·SlyA 过量表达菌株的构建 | 第29-30页 |
| ·重组菌 SlyA 蛋白的表达分析 | 第30-31页 |
| ·比较 E. coli THslyA 与 E. coli BLpslyA 的发酵特性 | 第31-32页 |
| ·荧光定量 PCR 研究 E. coli THslyA K4CPS 合成基因簇表达水平 | 第32-34页 |
| ·IPTG 诱导浓度对 E. coli THslyA 生产 K4CPS 的影响 | 第34页 |
| ·IPTG 添加时间对 E. coli THslyA 生产 K4CPS 的影响 | 第34-35页 |
| ·5-L 发酵罐考察 E. coli THslyA 的发酵特性 | 第35-37页 |
| ·K4CPS 合成基因簇 PR3 的修饰 | 第37-42页 |
| ·大肠杆菌 K4 PR3 启动子克隆和序列同源性分析 | 第37-38页 |
| ·PR3 启动子 3’端 UTR 缺失突变株的构建与验证 | 第38-40页 |
| ·UTR 缺失突变对 K4CPS 合成的影响 | 第40页 |
| ·UTR 缺失突变对 PR3 启动子强度的影响 | 第40-42页 |
| 第四章 结论与展望 | 第42-44页 |
| ·主要结论 | 第42-43页 |
| ·展望 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第48页 |
