| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 专业术语和英文缩写词表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-22页 |
| 1.1 硝基呋喃类药物概述 | 第14页 |
| 1.2 呋喃西林概述 | 第14-15页 |
| 1.3 氨基脲的来源概述 | 第15-16页 |
| 1.3.1 呋喃西林代谢物SEM | 第15页 |
| 1.3.2 SEM来源于偶氮二甲酰胺(ADA) | 第15-16页 |
| 1.3.3 使用次氯酸钠时产生氨基脲 | 第16页 |
| 1.3.4 氨基脲的其它来源 | 第16页 |
| 1.4 呋喃西林代谢物SEM检测分析方法的研究现状 | 第16-19页 |
| 1.4.1 高效液相色谱-串联质谱法 | 第16-17页 |
| 1.4.2 酶联免疫吸附检测法 | 第17-18页 |
| 1.4.3 免疫胶体金层析技术 | 第18-19页 |
| 1.5 荧光定量免疫层析技术简介 | 第19-20页 |
| 1.6 本研究的主要内容及技术路线 | 第20-22页 |
| 1.6.1 主要内容 | 第20-21页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 呋喃西林代谢物人工抗原的合成与鉴定 | 第22-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 主要仪器与设备 | 第22-23页 |
| 2.1.2 试剂及材料 | 第23-24页 |
| 2.2 人工抗原的合成方法 | 第24-26页 |
| 2.2.1 SEM衍生化半抗原NOCPSEM的合成 | 第24-25页 |
| 2.2.1.1 半抗原衍生物NOCP的合成 | 第24页 |
| 2.2.1.2 半抗原NOCPSEM的合成 | 第24-25页 |
| 2.2.2 SEM人工抗原的合成 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-29页 |
| 2.3.1 半抗原衍生物NOCP合成的结果鉴定 | 第26-28页 |
| 2.3.2 半抗原NOCPSEM合成的结果鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 人工抗原合成的结果鉴定 | 第29页 |
| 2.4 本章小结 | 第29-31页 |
| 第三章 抗 2-NPSEM单克隆抗体的制备与鉴定 | 第31-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-34页 |
| 3.1.1 主要设备 | 第31-32页 |
| 3.1.2 试剂耗材 | 第32-33页 |
| 3.1.3 主要的溶液配制 | 第33-34页 |
| 3.2 抗 2-NPSEM单克隆抗体的制备方法 | 第34-39页 |
| 3.2.1 小鼠免疫 | 第34页 |
| 3.2.2 鼠多抗特性测定及最佳小鼠的选择 | 第34-35页 |
| 3.2.3 细胞融合 | 第35-36页 |
| 3.2.3.1 Sp2/0 细胞的准备 | 第35页 |
| 3.2.3.2 饲养细胞的准备 | 第35-36页 |
| 3.2.3.3 细胞融合 | 第36页 |
| 3.2.4 融合细胞的筛选 | 第36页 |
| 3.2.5 阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第36页 |
| 3.2.6 单抗腹水制备 | 第36-37页 |
| 3.2.7 抗 2-NPSEM单克隆抗体的特性评价 | 第37-39页 |
| 3.2.7.1 包被抗原和抗体工作浓度的确定 | 第37-38页 |
| 3.2.7.2 抗 2-NPSEM单克隆抗体的效价测定 | 第38页 |
| 3.2.7.3 抗 2-NPSEM单克隆抗体的灵敏度和特异性测定 | 第38-39页 |
| 3.2.7.3.1 酶标板的制备方法 | 第38页 |
| 3.2.7.3.2 抗体溶液的配制 | 第38页 |
| 3.2.7.3.3 SEM衍生物标准溶液的配制 | 第38页 |
| 3.2.7.3.4 ciELISA法标准曲线的建立 | 第38页 |
| 3.2.7.3.5 特异性检测 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-42页 |
| 3.3.1 鼠多抗特性测定及最佳小鼠的选择 | 第39-40页 |
| 3.3.1.1 鼠多抗的特性测定 | 第39页 |
| 3.3.1.2 最佳小鼠的选择 | 第39-40页 |
| 3.3.2 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第40-41页 |
| 3.3.3 抗 2-NPSEM单克隆抗体的特性评价 | 第41-42页 |
| 3.3.3.1 包被抗原和抗体工作浓度的确定 | 第41页 |
| 3.3.3.2 抗 2-NPSEM单克隆抗体的效价检测 | 第41页 |
| 3.3.3.3 单克隆抗体的灵敏度和特异性的ciELISA法检测结果 | 第41-42页 |
| 3.4 本章小结 | 第42-44页 |
| 第四章 荧光定量免疫层析技术平台的建立及其条件优化 | 第44-67页 |
| 4.1 实验材料 | 第45-47页 |
| 4.1.1 主要设备 | 第45页 |
| 4.1.2 试剂耗材 | 第45-46页 |
| 4.1.3 主要的溶液配制 | 第46-47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-54页 |
| 4.2.1 荧光定量免疫层析试纸条的制备 | 第47-48页 |
| 4.2.2 荧光微球标记抗体 | 第48-50页 |
| 4.2.2.1 活化剂EDC的用量优化 | 第48-49页 |
| 4.2.2.2 活化时间的优化 | 第49页 |
| 4.2.2.3 偶联时间的优化 | 第49页 |
| 4.2.2.4 抗体标记量的优化 | 第49-50页 |
| 4.2.3 荧光定量免疫层析试纸条构建条件的优化 | 第50-52页 |
| 4.2.3.1 荧光缓冲液的优化 | 第50页 |
| 4.2.3.2 样品垫处理液的优化 | 第50-51页 |
| 4.2.3.3 试纸条C线工作浓度的确定 | 第51页 |
| 4.2.3.4 试纸条T线工作浓度及标记抗体后荧光微球稀释倍数的确定 | 第51-52页 |
| 4.2.3.5 定量标准曲线的建立 | 第52页 |
| 4.2.4 荧光定量免疫层析试纸条的性能研究 | 第52-54页 |
| 4.2.4.1 样品前处理方法 | 第52页 |
| 4.2.4.2 各类样本中添加回收率的测定 | 第52-53页 |
| 4.2.4.3 假阳性率的测定 | 第53页 |
| 4.2.4.4 假阴性率的测定 | 第53页 |
| 4.2.4.5 实际样本中的特异性测定 | 第53页 |
| 4.2.4.6 荧光定量检测试纸条的稳定性研究 | 第53页 |
| 4.2.4.7 荧光定量检测试纸条的精密度测试 | 第53-54页 |
| 4.3 结果与分析 | 第54-65页 |
| 4.3.1 荧光标记抗体 | 第54-56页 |
| 4.3.1.1 活化剂EDC用量的确定 | 第54-55页 |
| 4.3.1.2 活化时间的确定 | 第55页 |
| 4.3.1.3 偶联时间的确定 | 第55-56页 |
| 4.3.1.4 抗体标记量的确定 | 第56页 |
| 4.3.2 荧光定量免疫层析试纸条构建条件的优化 | 第56-59页 |
| 4.3.2.1 荧光缓冲液的确定 | 第56-57页 |
| 4.3.2.2 样品垫处理液的确定 | 第57页 |
| 4.3.2.3 试纸条C线工作浓度的确定 | 第57-58页 |
| 4.3.2.4 试纸条T线工作浓度及标记抗体后荧光微球稀释倍数的确定 | 第58页 |
| 4.3.2.5 定量标准曲线的确定 | 第58-59页 |
| 4.3.3 荧光定量免疫层析试纸条的性能研究 | 第59-65页 |
| 4.3.3.1 不同样本中添加回收率的测定 | 第59-62页 |
| 4.3.3.2 假阳性率的检测结果 | 第62页 |
| 4.3.3.3 假阴性率的检测结果 | 第62-63页 |
| 4.3.3.4 实际样本中的特异性检测结果 | 第63页 |
| 4.3.3.5 荧光定量检测试纸条的稳定性检测结果 | 第63-64页 |
| 4.3.3.6 荧光定量检测试纸条的精密度测试结果 | 第64-65页 |
| 4.4 本章小结 | 第65-67页 |
| 结论与展望 | 第67-69页 |
| 1. 结论 | 第67页 |
| 2. 创新点 | 第67页 |
| 3. 展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 附件 | 第78页 |
