| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 综述 | 第12-24页 |
| 1.1 植物内生真菌的研究概况 | 第12-16页 |
| 1.1.1 植物内生真菌的定义 | 第12-13页 |
| 1.1.2 内生真菌与宿主植物的关系 | 第13-15页 |
| 1.1.3 植物内生真菌代谢产物研究 | 第15-16页 |
| 1.2 鸦胆子中活性物质及内生真菌研究概况 | 第16-18页 |
| 1.2.1 抗肿瘤活性 | 第16-17页 |
| 1.2.2 抗病毒活性 | 第17页 |
| 1.2.3 抗虫抗病活性 | 第17-18页 |
| 1.2.4 鸦胆子内生真菌研究概况 | 第18页 |
| 1.3 抗病毒活性物质研究现状 | 第18-23页 |
| 1.3.1 抗植物病毒活性物质的来源 | 第18-21页 |
| 1.3.2 抗烟草花叶病毒物质的作用机制 | 第21-22页 |
| 1.3.3 抗病毒物质的应用及存在问题 | 第22-23页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 1.4.1 研究的目的 | 第23页 |
| 1.4.2 研究的意义 | 第23-24页 |
| 2 试验材料与方法 | 第24-37页 |
| 2.1 试验材料、试剂和仪器 | 第24-26页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 试验仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.4 培养基的配制 | 第25-26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-37页 |
| 2.2.1 TMV的提取及其抗体的制备 | 第26-28页 |
| 2.2.1.1 TMV的提纯及保存 | 第26-27页 |
| 2.2.1.2 烟草花叶病毒粒体的电镜观察 | 第27页 |
| 2.2.1.3 病毒浓度的计算 | 第27页 |
| 2.2.1.4 烟草花叶病毒(TMV)抗血清的制备及保存 | 第27页 |
| 2.2.1.5 烟草花叶病毒(TMV)抗血清效价的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.1.6 烟草花叶病毒(TMV)抗血清最适工作浓度的测定 | 第28页 |
| 2.2.2 鸦胆子内生真菌的分离、纯化及保存 | 第28-30页 |
| 2.2.2.1 植物样品表面消毒及预处理 | 第28-29页 |
| 2.2.2.2 内生真菌的分离及纯化 | 第29页 |
| 2.2.2.3 内生真菌的保存 | 第29-30页 |
| 2.2.2.3.1 斜面试管低温保存 | 第29页 |
| 2.2.2.3.2 无菌蒸馏水中保存 | 第29-30页 |
| 2.2.2.3.3 冷冻甘油管保存 | 第30页 |
| 2.2.3 抗烟草花叶病毒活性菌株的筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.3.1 内生真菌发酵液的制备 | 第30页 |
| 2.2.3.2 内生真菌发酵液粗提物的制备 | 第30页 |
| 2.2.3.3 对照药剂及粗提物的配制 | 第30页 |
| 2.2.3.4 病毒浓度标准曲线的制作 | 第30页 |
| 2.2.3.5 抗烟草花叶病毒增殖活性的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.3.6 抗烟草花叶病毒侵染活性的测定 | 第31页 |
| 2.2.4 活性菌株R11的鉴定 | 第31-34页 |
| 2.2.4.1 形态学鉴定(魏景超，1979) | 第31页 |
| 2.2.4.2 分子生物学鉴定（张颖慧等，2008;吴发红等，2009; Cheng et al，2004 ) | 第31-34页 |
| 2.2.5 R11菌株的发酵条件优化 | 第34-37页 |
| 2.2.5.1 种子液的制备 | 第34页 |
| 2.2.5.2 生物量的测定(朱会霞和孙金旭，2008;孔凡敏等，2010) | 第34页 |
| 2.2.5.3 基础培养基的筛选 | 第34-35页 |
| 2.2.5.4 碳源的筛选 | 第35页 |
| 2.2.5.5 氮源的筛选 | 第35页 |
| 2.2.5.6 无机盐的筛选（谢明，2003 ) | 第35页 |
| 2.2.5.7 碳源、氮源和无机盐的正交试验 | 第35-36页 |
| 2.2.5.8 发酵培养温度的确定 | 第36页 |
| 2.2.5.9 摇床转速的确定 | 第36页 |
| 2.2.5.10 接种量对发酵的影响 | 第36页 |
| 2.2.5.11 培养基体积对发酵的影响 | 第36页 |
| 2.2.5.12 培养时间对发酵的影响 | 第36页 |
| 2.2.5.13 培养基PH的筛选 | 第36页 |
| 2.2.5.14 液体发酵工艺正交试验设计 | 第36-37页 |
| 2.2.5.15 优化结果验证 | 第37页 |
| 2.2.6 活性物质的分离 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-62页 |
| 3.1 烟草花叶病毒的提取及其抗体的制备 | 第37-39页 |
| 3.1.1 病毒粒体的电镜观察结果及病毒浓度 | 第37-38页 |
| 3.1.2 烟草花叶病毒(TMV)抗血清效价及最适工作浓度 | 第38-39页 |
| 3.2 鸦胆子内生真菌的分离、纯化及保存 | 第39-41页 |
| 3.2.1 植物样品表面消毒结果 | 第39页 |
| 3.2.2 内生真菌的分离及纯化结果 | 第39-41页 |
| 3.3 抗烟草花叶病毒活性菌株的筛选 | 第41-48页 |
| 3.3.1 烟草花叶病毒标准曲线 | 第41-42页 |
| 3.3.2 抗烟草花叶病增殖活性的初筛结果 | 第42-44页 |
| 3.3.3 抗烟草花叶病增殖活性的复筛结果 | 第44-45页 |
| 3.3.4 抗烟草花叶病侵染活性筛选结果 | 第45-46页 |
| 3.3.5 R11菌株抗烟草花叶病增殖活性 | 第46-47页 |
| 3.3.6 R11菌株抗烟草花叶病侵染活性 | 第47-48页 |
| 3.4 活性菌株R11的鉴定 | 第48-51页 |
| 3.4.1 显微观察结果 | 第48-49页 |
| 3.4.2 分子鉴定结果 | 第49-51页 |
| 3.4.2.1 DNA提取和检测 | 第49页 |
| 3.4.2.2 目的片段的扩增 | 第49-50页 |
| 3.4.2.3 连接转化检测 | 第50页 |
| 3.4.2.4 测序结果与序列分析 | 第50-51页 |
| 3.5 R11菌株的发酵条件优化 | 第51-60页 |
| 3.5.1 基础培养基筛选结果 | 第51-52页 |
| 3.5.2 碳源筛选结果 | 第52-53页 |
| 3.5.3 氮源筛选结果 | 第53页 |
| 3.5.4 无机盐的筛选结果 | 第53-54页 |
| 3.5.5 碳源、氮源和无机盐的正交实验结果 | 第54-55页 |
| 3.5.6 温度对发酵的影响 | 第55页 |
| 3.5.7 摇床转速对发酵培养的影响 | 第55页 |
| 3.5.8 接种量对发酵培养的影响 | 第55-56页 |
| 3.5.9 培养基体积对发酵的影响 | 第56-57页 |
| 3.5.10 发酵时间对发酵的影响 | 第57页 |
| 3.5.11 PH对发酵培养的影响 | 第57-58页 |
| 3.5.12 正交实验设计 | 第58-59页 |
| 3.5.13 优化结果验证 | 第59页 |
| 3.5.14 小结 | 第59-60页 |
| 3.6 R11活性物质的抗TMV活性测定 | 第60-62页 |
| 3.6.1 化合物A抗TMV侵染结果 | 第60-61页 |
| 3.6.2 化合物A抗TMV增殖结果 | 第61-62页 |
| 4 讨论与展望 | 第62-64页 |
| 4.1 讨论 | 第62页 |
| 4.2 展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
