酵母菌中海藻糖合成酶基因的克隆及高效表达载体的构建
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-18页 |
| ·海藻糖的理化性质 | 第11页 |
| ·海藻糖的生物学功能 | 第11-13页 |
| ·海藻糖合成途径及其相关基因 | 第13-15页 |
| ·海藻糖的应用 | 第15-16页 |
| ·海藻糖分子生物学研究进展及本研究的意义 | 第16-18页 |
| 第二章 材料和方法 | 第18-28页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18-19页 |
| ·引物 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-28页 |
| ·实验用品的处理 | 第19-20页 |
| ·酵母总RNA的快速提取方案 | 第20页 |
| ·经典总RNA提取方案 | 第20-21页 |
| ·甲醛变性电泳检测总RNA的完整性 | 第21页 |
| ·RT-PCR体外扩增TPS1基因 | 第21-22页 |
| ·PCR产物的回收及纯化 | 第22-23页 |
| ·PCR纯化产物与pUCm-T克隆载体连接 | 第23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第24页 |
| ·α-互补筛选 | 第24页 |
| ·重组质粒的小量提取 | 第24-25页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第25页 |
| ·酶切产物的纯化及表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·菌体总蛋白的提取 | 第26页 |
| ·海藻糖的提取 | 第26页 |
| ·海藻糖的测定方法 | 第26-28页 |
| 第三章 结果与分析 | 第28-43页 |
| ·RNA完整性与纯度分析 | 第28-31页 |
| ·RNA实验用品的处理对RNA完整性的影响 | 第28页 |
| ·两种RNA提取方法完整性与纯度比较分析 | 第28-31页 |
| ·甲醛变性电泳检测总RNA的完整性 | 第31页 |
| ·RT-PCR体外扩增TPS1基因 | 第31页 |
| ·引物的设计 | 第31页 |
| ·PCR反应条件的优化 | 第31页 |
| ·目的基因与T载体连接与重组质粒的提取鉴定 | 第31-35页 |
| ·目的基因与T载体连接 | 第31-33页 |
| ·PCR鉴定 | 第33页 |
| ·酶切鉴定 | 第33页 |
| ·测序分析 | 第33-35页 |
| ·TPS1基因的表达 | 第35-39页 |
| ·高效表达载体的构建 | 第35-37页 |
| ·pHY01载体的构建 | 第35-37页 |
| ·pHY01的酶切鉴定 | 第37页 |
| ·pHY02载体的构建和酶切鉴定 | 第37页 |
| ·两种重组载体表达性能比较 | 第37页 |
| ·不同IPTG浓度对pHY02载体表达的影响 | 第37-39页 |
| ·海藻糖的测定结果 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-43页 |
| 第四章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
