| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语与中英文对照 | 第8-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-26页 |
| 1.1 葡萄霜霉病研究概况 | 第14-18页 |
| 1.1.1 葡萄霜霉病的危害 | 第14页 |
| 1.1.2 葡萄霜霉病抗性 | 第14-15页 |
| 1.1.3 葡萄霜霉菌生活史 | 第15-16页 |
| 1.1.4 葡萄霜霉菌致病力研究进展 | 第16-17页 |
| 1.1.5 葡萄霜霉菌群体遗传结构研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2 植物免疫 | 第18-22页 |
| 1.2.1 植物抗病机制 | 第18-19页 |
| 1.2.2 植物R蛋白与病原菌无毒蛋白之间的互作机制 | 第19-20页 |
| 1.2.3 植物R基因的分类 | 第20-21页 |
| 1.2.4 葡萄抗霜霉病R基因的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3 植物病原卵菌的效应因子研究概况 | 第22-25页 |
| 1.3.1 卵菌RxLR类效应因子的结构特征 | 第22-23页 |
| 1.3.2 卵菌RxLR类效应因子的毒性功能 | 第23-24页 |
| 1.3.3 葡萄霜霉菌的RxLR类效应因子研究进展 | 第24-25页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 中国葡萄霜霉菌的致病力与群体遗传结构分析 | 第26-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 供试葡萄霜霉菌与葡萄品种 | 第26-27页 |
| 2.1.2 供试引物 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.2.1 葡萄盆栽苗的种植 | 第28页 |
| 2.2.2 葡萄霜霉菌的纯化、扩繁与保存 | 第28-29页 |
| 2.2.3 葡萄霜霉菌的致病力分析 | 第29-30页 |
| 2.2.4 葡萄霜霉菌DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.5 PCR扩增 | 第31页 |
| 2.2.6 PCR产物检测 | 第31页 |
| 2.2.7 群体遗传学分析 | 第31-32页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.3.1 葡萄霜霉菌分离、纯化结果 | 第32-33页 |
| 2.3.2 葡萄霜霉菌致病力分析结果 | 第33-34页 |
| 2.3.3 葡萄霜霉菌群体结构多样性分析 | 第34-37页 |
| 2.3.4 葡萄霜霉菌群体的遗传分化与变异 | 第37-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-41页 |
| 第三章 中国山葡萄‘双红’抗霜霉病分子机制研究 | 第41-63页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 供试葡萄霜霉菌和葡萄品种 | 第41页 |
| 3.1.2主要试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第41-42页 |
| 3.1.4 供试引物 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-46页 |
| 3.2.1 葡萄盆栽苗的种植 | 第42页 |
| 3.2.2 葡萄霜霉菌的扩繁 | 第42页 |
| 3.2.3 葡萄的活体接菌 | 第42页 |
| 3.2.4 葡萄霜霉菌的组织学观察 | 第42-43页 |
| 3.2.5 葡萄叶片RNA的提取 | 第43页 |
| 3.2.6 cDNA文库构建和测序 | 第43-44页 |
| 3.2.7 数据分析 | 第44-45页 |
| 3.2.8 荧光定量PCR验证 | 第45页 |
| 3.2.9 水杨酸(SA)和茉莉酸(JA)的提取与测定 | 第45-46页 |
| 3.2.10 芪类化合物的提取与测定 | 第46页 |
| 3.2.11 过氧化氢的提取与测定 | 第46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-61页 |
| 3.3.1 霜霉菌菌株JL-7-2和ZJ-1-1侵染山葡萄‘双红’后的组织学观察 | 第46-48页 |
| 3.3.2 总RNA质量评估 | 第48页 |
| 3.3.3 转录组测序数据统计结果 | 第48-50页 |
| 3.3.4 山葡萄‘双红’中参与非亲和互作基因的鉴定 | 第50页 |
| 3.3.5 非亲和基因的GO和pathway富集分析 | 第50-53页 |
| 3.3.6 植物与病原菌互作 | 第53-54页 |
| 3.3.7 信号传导 | 第54-56页 |
| 3.3.8 次级代谢 | 第56页 |
| 3.3.9 病程相关蛋白 | 第56-57页 |
| 3.3.10 泛素化介导的蛋白水解 | 第57页 |
| 3.3.11 初级代谢 | 第57页 |
| 3.3.12 转录因子 | 第57-58页 |
| 3.3.13 转录组数据的qRT-PCR验证 | 第58-60页 |
| 3.3.14 植物激素、芪类化合物和ROS的测定结果 | 第60-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 山葡萄‘双红’VaRGA1基因的抗生物和非生物胁迫研究 | 第63-88页 |
| 4.1 实验材料 | 第63-65页 |
| 4.1.1 供试植物材料和植物病原菌 | 第63页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第63-64页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第64-65页 |
| 4.1.4 供试引物 | 第65页 |
| 4.2 实验方法 | 第65-75页 |
| 4.2.1 植物材料的培养 | 第65-66页 |
| 4.2.2 葡萄的活体接菌 | 第66页 |
| 4.2.3 山葡萄‘双红’的干旱处理和盐处理 | 第66页 |
| 4.2.4 RNA的提取 | 第66页 |
| 4.2.5 cDNA的合成 | 第66-67页 |
| 4.2.6 荧光定量PCR分析 | 第67页 |
| 4.2.7 山葡萄‘双红’VaRGA1基因的克隆 | 第67-69页 |
| 4.2.8 山葡萄‘双红’VaRGA1基因表达载体构建 | 第69-70页 |
| 4.2.9 农杆菌电击感受态的制备 | 第70页 |
| 4.2.10 农杆菌的电击转化 | 第70-71页 |
| 4.2.11 VaRGA1基因的亚细胞定分析 | 第71页 |
| 4.2.12 葡萄的瞬时转化和霜霉菌接种 | 第71页 |
| 4.2.13 烟草的稳定转化 | 第71-73页 |
| 4.2.14 转基因烟草抗病性分析 | 第73页 |
| 4.2.15 烟草激素含量的提取与测定 | 第73页 |
| 4.2.16 转基因烟草对抗旱胁迫耐受性分析 | 第73-74页 |
| 4.2.17 转基因烟草对抗盐胁迫耐受性分析 | 第74-75页 |
| 4.3 结果与分析 | 第75-85页 |
| 4.3.1 山葡萄‘双红’VaRGA1基因的序列特征 | 第75-77页 |
| 4.3.2 山葡萄‘双红’的VaRGA1受到霜霉菌侵染后的表达模式 | 第77-78页 |
| 4.3.3 山葡萄‘双红’的VaRGA1基因受到非生物胁迫后的表达模式 | 第78页 |
| 4.3.4 基因VaRGA1的亚细胞定位 | 第78-80页 |
| 4.3.5 VaRGA1基因的过表达提高对卵菌病原菌的抗性 | 第80页 |
| 4.3.6 VaRGA1基因的表达激活了SA信号传导途径和苯丙烷类代谢途径 | 第80-82页 |
| 4.3.7 VaRGA1转基因烟草表现出增强的耐旱性 | 第82-84页 |
| 4.3.8 VaRGA1转基因烟草表现出增强的耐盐性 | 第84-85页 |
| 4.4 讨论 | 第85-88页 |
| 第五章 葡萄霜霉菌的RxLR类效应因子的特征与功能研究 | 第88-116页 |
| 5.1 实验材料 | 第88-92页 |
| 5.1.1 供试植物材料和植物病原菌 | 第88页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第88-91页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第91-92页 |
| 5.2 实验方法 | 第92-101页 |
| 5.2.1 植物材料的培养 | 第92页 |
| 5.2.2 植物病原菌的接种 | 第92页 |
| 5.2.3 RNA的提取 | 第92页 |
| 5.2.4 cDNA文库构建和测序 | 第92页 |
| 5.2.5 转录组从头组装和RxLR效应因子预测 | 第92-93页 |
| 5.2.6 cDNA的合成 | 第93页 |
| 5.2.7 荧光定量PCR分析 | 第93页 |
| 5.2.8 农杆菌感受态的制备 | 第93页 |
| 5.2.9 RxLR类效应因子的亚细胞定位分析 | 第93-94页 |
| 5.2.10 RxLR类效应因子抑制PCD的功能分析 | 第94页 |
| 5.2.11 利用酵母双杂实验筛选效应因子PvRxL13在葡萄体内的靶蛋白 | 第94-97页 |
| 5.2.12 分子荧光互补(BiFC) | 第97-98页 |
| 5.2.13 效应因子PvRxL13与靶蛋白HY5在体内的共定位分析 | 第98页 |
| 5.2.14 Western Blot分析 | 第98-99页 |
| 5.2.15 免疫共沉淀(CoIP) | 第99页 |
| 5.2.16 病毒介导的基因沉默(VIGS) | 第99-100页 |
| 5.2.17 GUS定性和定量检测 | 第100页 |
| 5.2.18 葡萄的瞬时转化 | 第100页 |
| 5.2.19 烟草的稳定转化 | 第100页 |
| 5.2.20 转基因烟草抗病性分析 | 第100-101页 |
| 5.2.21 植物激素的提取与测定 | 第101页 |
| 5.2.22 过氧化氢的测定 | 第101页 |
| 5.2.23 效应因子PvRxL13的转基因烟草的数字表达谱分析 | 第101页 |
| 5.3 结果与分析 | 第101-115页 |
| 5.3.1 RNA质量评估 | 第101-102页 |
| 5.3.2 转录组测序与重头组装 | 第102页 |
| 5.3.3 霜霉菌分泌的胞外和胞内效应因子 | 第102-103页 |
| 5.3.4 葡萄霜霉菌菌株JL-7-2在侵染不同抗性寄主的过程中RxLR类效应因子的表达谱分析 | 第103-104页 |
| 5.3.5 葡萄霜霉菌菌株JL-7-2的RxLR类效应因子的亚细胞定位 | 第104-105页 |
| 5.3.6 葡萄霜霉菌菌株JL-7-2的RxLR类效应因子抑制Bax、INF1和Avr3a-R3a引起的PCD | 第105-106页 |
| 5.3.7 效应因子PvRxL13与葡萄的转录因子HY5互作 | 第106-108页 |
| 5.3.8 效应因子PvRxL13的TPR结构域和核定位信号是其与HY5互作和抑制PCD所必须的 | 第108-109页 |
| 5.3.9 转录因子HY5的bzip结构是其与效应因子PvRxL13互作必不可少的 | 第109-110页 |
| 5.3.10 靶基因HY5的沉默降低了烟草对疫霉病菌的抗性 | 第110页 |
| 5.3.11 效应因子PvRxL13抑制转录因子HY5的转录活性 | 第110-112页 |
| 5.3.12 效应因子PvRxL13的表达降低了寄主的抗病性 | 第112-113页 |
| 5.3.13 转基因烟草全基因组表达分析 | 第113-115页 |
| 5.4 讨论 | 第115-116页 |
| 结论 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-129页 |
| 附录 | 第129-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 作者简介 | 第135页 |
