中文摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
前言 | 第9-10页 |
第一章 文献综述 | 第10-30页 |
1.1 酿酒酵母纺锤体极体 | 第10-21页 |
1.1.1 纺锤体极体简介 | 第10页 |
1.1.2 纺锤体极体的结构 | 第10-12页 |
1.1.3 纺锤体极体的组分 | 第12-19页 |
1.1.4 纺锤体极体(SPB)的复制与调控 | 第19-21页 |
1.2 酿酒酵母纺锤体极体(SPB)的功能 | 第21-27页 |
1.2.1 SPB 在染色体分离、核配,核定位和纺锤体定向中的作用 | 第22-24页 |
1.2.2 SPB 在生孢过程中的作用 | 第24-27页 |
1.3 酿酒酵母纺锤体极体(SPB)蛋白组分Sfi1p | 第27-29页 |
1.3.1 Sfi1p 的发现 | 第27页 |
1.3.2 Sfi1p 的研究进展 | 第27-29页 |
1.4 本研究的目的和内容 | 第29-30页 |
第二章 材料与方法 | 第30-57页 |
2.1 实验材料 | 第30-43页 |
2.1.1 质粒、菌株与引物 | 第30-37页 |
2.1.2 主要实验仪器 | 第37-38页 |
2.1.3 主要试剂 | 第38-39页 |
2.1.4 培养基 | 第39-41页 |
2.1.5 主要溶液 | 第41-43页 |
2.2 实验方法 | 第43-57页 |
2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第43-44页 |
2.2.2 小规模提取大肠杆菌质粒法(CTAB法) | 第44-45页 |
2.2.3 酵母染色体的快速分离 | 第45页 |
2.2.4 PCR 扩增反应 | 第45-46页 |
2.2.5 定点诱变 PCR | 第46-47页 |
2.2.6 融合 PCR | 第47页 |
2.2.7 DNA 的限制酶消化 | 第47-48页 |
2.2.8 DNA 的连接反应 | 第48-49页 |
2.2.9 DNA 的琼脂糖凝胶电泳 | 第49页 |
2.2.10 从琼脂糖中回收DNA | 第49页 |
2.2.11 酵母细胞快速转化方法 | 第49-50页 |
2.2.12 酵母细胞高效转化法 | 第50-51页 |
2.2.13 质粒缺口修复(Gap-Repair) | 第51页 |
2.2.14 酵母中质粒的回收 | 第51页 |
2.2.15 酵母交配型的验证 | 第51-52页 |
2.2.16 产孢及四分体孢子拆分 | 第52页 |
2.2.17 酵母菌高效生孢法 | 第52-53页 |
2.2.18 Dilution实验方法 | 第53页 |
2.2.19 双杂交实验方法 | 第53页 |
2.2.20 蛋白质浓度的定量(Bio-Rad方法) | 第53-54页 |
2.2.21 玻璃珠法提取酿酒酵母总蛋白 | 第54页 |
2.2.22 免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP) | 第54-55页 |
2.2.23 SDS-聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第55页 |
2.2.24 Western blot 蛋白免疫印记实验 | 第55-57页 |
第三章 SFI1温度敏感突变株的构建 | 第57-71页 |
3.1 概述 | 第57页 |
3.2 结果与讨论 | 第57-69页 |
3.2.1 SFI1 温度敏感突变等位基因的构建 | 第57-64页 |
3.2.2 SFI1 温度敏感突变等位基因的序列分析 | 第64-67页 |
3.2.3 SFI1 温度敏感突变等位基因的整合 | 第67-68页 |
3.2.4 SFI1 N 端的序列缺失 | 第68-69页 |
3.3 本章小结 | 第69-71页 |
第四章 Sfi1p 与其他 SPB 组分间相互作用的研究 | 第71-88页 |
4.1 概述 | 第71页 |
4.2 结果与讨论 | 第71-84页 |
4.2.1 Sfi1p 与 SPB 组分间的遗传相互作用 | 第71-74页 |
4.2.2 Sfi1p 与 SPB 组分相互作用的双杂交筛选 | 第74-79页 |
4.2.3 Sfi1p 与 Spc29p 的免疫共沉淀 | 第79-81页 |
4.2.4 Spc29-GFP 在 SFI1 温度敏感突变株中的定位 | 第81-84页 |
4.3 本章小节 | 第84-88页 |
第五章 Sfi1p在核配和生孢过程中作用的研究 | 第88-95页 |
5.1 概述 | 第88页 |
5.2 结果与讨论 | 第88-94页 |
5.2.1 Sfi1p 突变对生孢过程的影响 | 第88-92页 |
5.2.2 Sfi1p 突变对核配的影响 | 第92-94页 |
5.3 本章小节 | 第94-95页 |
第六章 总结与展望 | 第95-98页 |
6.1 主要工作总结 | 第95-97页 |
6.2 相关工作的展望 | 第97-98页 |
参考文献 | 第98-107页 |
攻读博士学位期间发表的论文和参加科研情况 | 第107-108页 |
附录1 生化名词缩写 | 第108-109页 |
附录2 实验补充说明 | 第109-116页 |
致谢 | 第116页 |