| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| 1.1 白酒工业概况 | 第9页 |
| 1.2 白酒中主要风味物质概述 | 第9-13页 |
| 1.2.1 醇类物质 | 第10页 |
| 1.2.2 醛类物质 | 第10页 |
| 1.2.3 酸类物质 | 第10-11页 |
| 1.2.4 酯类物质 | 第11-13页 |
| 1.3 乳酸乙酯合成研究现状和发展趋势 | 第13-14页 |
| 1.4 酯类物质合成途径和机理 | 第14页 |
| 1.4.1 酯化反应途径 | 第14页 |
| 1.4.2 醇酰基转移酶途径 | 第14页 |
| 1.4.3 半缩醛反应途径 | 第14页 |
| 1.5 酰基CoA转移酶 | 第14-17页 |
| 1.5.1 酰基CoA转移酶家族的催化机制 | 第15-16页 |
| 1.5.2 丙酰CoA转移酶的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.6 醇酰基转移酶 | 第17-18页 |
| 1.6.1 酵母来源的醇酰基转移酶 | 第17页 |
| 1.6.2 植物来源的醇酰基转移酶 | 第17-18页 |
| 1.7 本课题的立题依据及研究内容 | 第18-20页 |
| 1.7.1 立题依据 | 第18-19页 |
| 1.7.2 本课题主要研究内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-26页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第20-22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-39页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第26-31页 |
| 2.2.2 目的基因的获得 | 第31-33页 |
| 2.2.3 PCR产物的回收 | 第33-34页 |
| 2.2.4 体外重组法质粒的构建 | 第34-37页 |
| 2.2.5 酵母菌的转化 | 第37-38页 |
| 2.2.6 KanMX筛选标记的去除及Cre-loxP切除原理 | 第38-39页 |
| 2.2.7 生长曲线的测定 | 第39页 |
| 2.2.8 亲本菌株的乳酸耐受性实验 | 第39页 |
| 2.2.9 发酵实验 | 第39页 |
| 2.3 发酵数据分析方法 | 第39-41页 |
| 2.3.1 CO_2排放量的测定 | 第39页 |
| 2.3.2 酒精度测定91] | 第39-40页 |
| 2.3.3 酸和醇等含量的测定 | 第40页 |
| 2.3.4 高级醇和酯类含量的测定 | 第40-41页 |
| 3 结果与讨论 | 第41-65页 |
| 3.1 产乳酸α(L)菌株的构建 | 第41-47页 |
| 3.1.1 Yep352-PK质粒的构建与验证 | 第41-42页 |
| 3.1.2 过表达ldhL1基因菌株的构建 | 第42-44页 |
| 3.1.3 出发株与重组菌株的生长性能比较 | 第44-45页 |
| 3.1.4 玉米液态白酒发酵实验 | 第45页 |
| 3.1.5 外源添加乳酸发酵实验 | 第45-47页 |
| 3.1.6 小结 | 第47页 |
| 3.2 产乳酸乙酯酿酒酵母菌株的构建 | 第47-59页 |
| 3.2.1 Pct表达盒的构建 | 第47-49页 |
| 3.2.2 AAT表达盒的构建 | 第49-51页 |
| 3.2.3 Pct、AAT代谢途径的引入 | 第51-55页 |
| 3.2.4 出发株与重组菌株的基本发酵性能比较 | 第55-57页 |
| 3.2.5 Pct、AAT代谢途径的引入对乳酸乙酯产量的影响 | 第57-58页 |
| 3.2.6 重组菌株的生长性能测定 | 第58页 |
| 3.2.7 小结 | 第58-59页 |
| 3.3 增加Pct拷贝数对乳酸乙酯产量的影响 | 第59-65页 |
| 3.3.1 两拷贝和三拷贝Pct重组菌株的构建 | 第59-62页 |
| 3.3.2 出发株与重组菌株生长性能及基本发酵性能比较 | 第62-63页 |
| 3.3.3 提高Pct拷贝数对乳酸乙酯产量的影响 | 第63-64页 |
| 3.3.4 小结 | 第64-65页 |
| 4 结论 | 第65-66页 |
| 5 展望 | 第66-67页 |
| 6 参考文献 | 第67-73页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第73-74页 |
| 8 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-81页 |
