| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1.0 引言 | 第13页 |
| 1.1 重组人白细胞介素11(rhIL-11)概述 | 第13-18页 |
| 1.1.1 重组人白细胞介素11 | 第13-14页 |
| 1.1.2 IL-11的发现 | 第14页 |
| 1.1.3 rhIL-11的氨基酸顺序和结构特征 | 第14-15页 |
| 1.1.4 rhIL-11的生物学作用 | 第15-17页 |
| 1.1.5 rhIL-11的药效和药代 | 第17-18页 |
| 1.2 巴斯德毕赤酵母的概述 | 第18-22页 |
| 1.2.1 巴斯德毕赤酵母 | 第18-19页 |
| 1.2.2 巴斯德毕赤酵母的优缺点 | 第19-20页 |
| 1.2.3 巴斯德毕赤酵母常用载体 | 第20-21页 |
| 1.2.4 多拷贝 | 第21页 |
| 1.2.5 一般发酵过程 | 第21-22页 |
| 1.2.6 一般纯化方法 | 第22页 |
| 1.3 发酵策略对外源蛋白表达的影响 | 第22-26页 |
| 1.3.1 补料策略的影响 | 第22-23页 |
| 1.3.2 pH的影响 | 第23-24页 |
| 1.3.3 温度的影响 | 第24-25页 |
| 1.3.4 溶解氧的影响 | 第25页 |
| 1.3.5 氨基酸的影响 | 第25页 |
| 1.3.6 无机盐的影响 | 第25-26页 |
| 1.4 课题的研究背景及意义 | 第26-27页 |
| 1.5 研究思路 | 第27-28页 |
| 第二章 重组毕赤酵母摇瓶发酵条件的研究 | 第28-40页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2. 实验材料与设备 | 第28-31页 |
| 2.2.1 菌种 | 第28-29页 |
| 2.2.2 原材料及设备 | 第29-30页 |
| 2.2.3 实验培养基 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-33页 |
| 2.3.1. 碳源对毕赤酵母生长的影响 | 第31页 |
| 2.3.2 诱导温度对rhIL-11表达的影响 | 第31页 |
| 2.3.3 接种菌体密度对rhIL-11表达的影响 | 第31页 |
| 2.3.4 甲醇浓度对rhIL-11表达的影响 | 第31页 |
| 2.3.5 pH对rhIL-11表达的影响 | 第31-32页 |
| 2.3.6 诱导时间对rhIL-11表达的影响 | 第32页 |
| 2.3.7 分析测定方法 | 第32-33页 |
| 2.3.7.1 细胞光密度分析 | 第32页 |
| 2.3.7.2 表达产物分析 | 第32-33页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第33-39页 |
| 2.4.1 摇瓶发酵培养条件的研究结果 | 第33-38页 |
| 2.4.1.1 碳源对毕赤酵母生长的影响 | 第33-34页 |
| 2.4.1.2 诱导温度对rhIL-11表达的影响 | 第34页 |
| 2.4.1.3 接种比率对rhIL-11表达的影响 | 第34-35页 |
| 2.4.1.4 甲醇浓度对rhIL-11表达的影响 | 第35-36页 |
| 2.4.1.5 pH对rhIL-11表达的影响 | 第36页 |
| 2.4.1.6 诱导时间对rhIL-11表达的影响 | 第36-37页 |
| 2.4.1.7 重组毕赤酵母工程菌的摇瓶条件优化方案 | 第37-38页 |
| 2.4.2 讨论 | 第38-39页 |
| 2.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 毕赤酵母生产rhIL-11发酵条件的优化 | 第40-53页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-42页 |
| 3.2.1 菌种 | 第40页 |
| 3.2.2 原辅料 | 第40-41页 |
| 3.2.3 仪器设备 | 第41-42页 |
| 3.2.4 YPD种子培养基 | 第42页 |
| 3.2.5 发酵培养基 | 第42页 |
| 3.2.6 甘油补料培养基 | 第42页 |
| 3.2.7 PTM1(微量元素)储液配方 | 第42页 |
| 3.3. 实验方法 | 第42-44页 |
| 3.3.1 重组毕赤酵母在22L发酵罐中的高密度发酵实验 | 第42-43页 |
| 3.3.2. 发酵条件优化 | 第43-44页 |
| 3.3.2.1 诱导初始OD梯度实验 | 第43页 |
| 3.3.2.2 甲醇补料速度控制研究 | 第43页 |
| 3.3.2.3 诱导PH梯度实验 | 第43-44页 |
| 3.3.2.4 诱导温度梯度实验 | 第44页 |
| 3.3.2.5 诱导时间梯度实验 | 第44页 |
| 3.3.3. 分析测定方法 | 第44页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第44-52页 |
| 3.4.1 诱导初始OD对rhI-11表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.2 甲醇补料速度对rhI-11表达的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.3 PH对rhI-11表达的影响 | 第46页 |
| 3.4.4 诱导温度对rhI-11表达的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.5 诱导时间对rhI-11表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.6 优化后的发酵方法 | 第48-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 外源蛋白表达条件的优化和发酵放大 | 第53-73页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料 | 第53-56页 |
| 4.2.1 菌种 | 第53页 |
| 4.2.2 实验材料 | 第53-55页 |
| 4.2.3 实验设备 | 第55页 |
| 4.2.4 发酵培养基 | 第55-56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-58页 |
| 4.3.1 22L发酵罐中的高密度发酵实验 | 第56-57页 |
| 4.3.2. 添加氨基酸实验 | 第57页 |
| 4.3.3 蛋白水解酶抑制实验 | 第57-58页 |
| 4.3.4 控制蛋白聚体实验 | 第58页 |
| 4.3.5 分析测定方法 | 第58页 |
| 4.3.5.1 细胞光密度分析 | 第58页 |
| 4.3.5.2 菌体死亡率检测 | 第58页 |
| 4.3.5.3 温度、pH、转速、溶氧及补料速度检测 | 第58页 |
| 4.3.5.4 表达产物分析 | 第58页 |
| 4.4 结果与分析 | 第58-63页 |
| 4.4.1 添加氨基酸实验 | 第58-59页 |
| 4.4.2. 蛋白水解酶抑制实验 | 第59-60页 |
| 4.4.3 控制蛋白聚体实验 | 第60-61页 |
| 4.4.4 发酵新工艺实验(22L发酵罐) | 第61-63页 |
| 4.5 150L发酵罐发酵放大实验 | 第63-67页 |
| 4.6 硫酸铵沉淀目的蛋白实验 | 第67页 |
| 4.7 rhIL-11纯化工艺 | 第67-71页 |
| 4.8 rhIL-11鉴定 | 第71-72页 |
| 4.9 本章小结 | 第72-73页 |
| 第五章 结论和建议 | 第73-76页 |
| 5.1 结论 | 第73-75页 |
| 5.2 建议 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 附件 | 第80-87页 |
| 作者简介 | 第87页 |
