| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第10-25页 |
| 1.1 重组蛋白药物的市场概况 | 第10-12页 |
| 1.2 重组大肠杆菌表达系统 | 第12-17页 |
| 1.2.1 表达载体与宿主菌 | 第13-14页 |
| 1.2.2 重组蛋白在大肠杆菌中的表达形式 | 第14-17页 |
| 1.3 重组大肠杆菌高密度发酵 | 第17-19页 |
| 1.4 重组蛋白的分离纯化方法 | 第19-20页 |
| 1.5 大肠杆菌重组蛋白的可溶性表达 | 第20-23页 |
| 1.5.1 发酵策略的控制 | 第21-22页 |
| 1.5.2 共表达分子伴侣 | 第22-23页 |
| 1.5.3 融合表达技术 | 第23页 |
| 1.6 本课题的目的、意义和主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第2章 大肠杆菌重组蛋白发酵调控策略研究 | 第25-46页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第25-26页 |
| 2.2.2 仪器与试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.3 培养基 | 第27页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第27-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.3.1 表达rhGH大肠杆菌的培养 | 第29页 |
| 2.3.2 表达rhGH大肠杆菌的发酵调控策略 | 第29-30页 |
| 2.3.3 多种重组大肠杆菌的发酵 | 第30页 |
| 2.3.4 参数测定方法 | 第30-33页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第33-44页 |
| 2.4.1 培养基中磷酸盐浓度对菌体生长和rhGH表达量的影响 | 第33-34页 |
| 2.4.2 提高rhGH表达量的补料策略对比 | 第34-41页 |
| 2.4.3 三种补料策略的补料分批发酵结果分析 | 第41-42页 |
| 2.4.4 多种重组蛋白的发酵表达 | 第42-44页 |
| 2.5 小结 | 第44-46页 |
| 第3章 大肠杆菌重组蛋白的可溶性表达研究 | 第46-60页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-48页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第46页 |
| 3.2.2 仪器和试剂 | 第46-48页 |
| 3.2.3 培养基 | 第48页 |
| 3.2.4 蛋白纯化相关溶液 | 第48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-50页 |
| 3.3.1 最佳诱导表达时间的选择 | 第48页 |
| 3.3.2 重组LT-A的可溶性表达 | 第48-50页 |
| 3.3.3 重组大肠杆菌不耐热肠毒素包涵体的纯化 | 第50页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第50-59页 |
| 3.4.1 诱导表达时间对重组LT-A表达量的影响 | 第50-51页 |
| 3.4.2 诱导剂添加时刻对重组LT-A可溶性表达的影响 | 第51-52页 |
| 3.4.3 IPTG浓度对重组LT-A可溶性表达的影响 | 第52页 |
| 3.4.4 培养基中葡萄糖浓度对重组LT-A可溶性表达的影响 | 第52-53页 |
| 3.4.5 卡那霉素添加量对重组LT-A可溶性表达的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.6 蔗糖添加量对重组LT-A可溶性表达的影响 | 第54页 |
| 3.4.7 重组大肠杆菌分批发酵表达可溶性LT-A | 第54-55页 |
| 3.4.8 重组大肠杆菌补料-分批发酵表达可溶性LT-A | 第55-57页 |
| 3.4.9 包涵体LT-A的变性和复性 | 第57页 |
| 3.4.10 包涵体LT-A的层析纯化 | 第57-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-60页 |
| 第4章 重组大肠杆菌表达外源蛋白的共性发酵技术总结与展望 | 第60-62页 |
| 4.1 论文总结 | 第60-61页 |
| 4.2 展望 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
