啤酒酵母中乙醇脱氢酶基因Ⅰ的扩增与表达
| 独创性声明 | 第1页 |
| 关于学位论文使用授权的说明 | 第2-3页 |
| 摘 要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| ·啤酒发展研究概况 | 第8-9页 |
| ·啤酒酵母的发展状况 | 第9-10页 |
| ·啤酒酵母的作用 | 第9页 |
| ·啤酒酵母育种研究进展 | 第9-10页 |
| ·啤酒风味物质的研究 | 第10-11页 |
| ·乙醛的性质及其研究 | 第11-15页 |
| ·啤酒中乙醛的性质和代谢途径 | 第11-12页 |
| ·啤酒中乙醛的研究 | 第12-15页 |
| ·实验方案 | 第15-17页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第17-39页 |
| ·仪器、试剂及培养基 | 第17-22页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·主要试剂 | 第18-20页 |
| ·主要试剂的制备 | 第20-21页 |
| ·主要培养基的制备 | 第21-22页 |
| ·菌种及质粒 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第23页 |
| ·酵母菌的培养 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
| ·YIp5 质粒的提取 | 第24-25页 |
| ·质粒的纯化:使用质粒纯化试剂盒纯化质粒 | 第25-26页 |
| ·质粒的双酶切 | 第26-27页 |
| ·用 EcoRⅠ单酶切质粒 | 第26页 |
| ·处理单酶切产物 | 第26页 |
| ·用 SaIⅠ酶切单酶切产物 | 第26-27页 |
| ·双酶切产物的处理 | 第27页 |
| ·酶切产物的回收 | 第27页 |
| ·玻璃珠法提酵母菌染色体 DNA | 第27-28页 |
| ·聚合酶链式反应获得目的片段 | 第28-30页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第28页 |
| ·ADHI 引物的设计 | 第28-29页 |
| ·引物的优化设计 | 第29-30页 |
| ·PCR 产物的双酶切 | 第30页 |
| ·PCR 双酶切产物和载体连接 | 第30页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第30-32页 |
| ·重组质粒的验证 | 第32页 |
| ·重组质粒的抗性验证 | 第32页 |
| ·重组质粒的双酶切验证 | 第32页 |
| ·重组质粒 PCR 验证 | 第32页 |
| ·重组质粒线性化处理后转化酵母 | 第32-33页 |
| ·改良菌种的鉴定 | 第33-34页 |
| ·抗性验证 | 第33-34页 |
| ·改良菌株与野生型菌株的的乙醇脱氢酶Ⅰ活性比较 | 第34页 |
| ·啤酒酒精度的测定方法 | 第34-35页 |
| ·原麦汁浓度的测定 | 第35-36页 |
| ·双乙酰的测定 | 第36页 |
| ·真正（实际）发酵度的测定 | 第36-37页 |
| ·啤酒酵母降糖实验 | 第37页 |
| ·气相色谱法测定发酵液风味指标 | 第37-39页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第39-52页 |
| ·载体质粒的构建 | 第39-41页 |
| ·YIp5 质粒的提取和纯化 | 第39页 |
| ·YIp5 质粒的单、双酶切 | 第39-41页 |
| ·ADHI 的 PCR 扩增和酶切处理 | 第41-42页 |
| ·ADHI 的 PCR 扩增 | 第41-42页 |
| ·测序验证 | 第42页 |
| ·PCR 产物的双酶切处理 | 第42页 |
| ·重组质粒的构建和验证 | 第42-46页 |
| ·载体质粒与目的基因片段的连接 | 第42-44页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的验证 | 第45-46页 |
| ·酵母转化子的构建和验证 | 第46-47页 |
| ·转化子的挑选 | 第46-47页 |
| ·转化子的验证 | 第47页 |
| ·酵母转化子的酶活检测 | 第47-48页 |
| ·改良菌株与原始菌株的对比发酵实验 | 第48-52页 |
| ·死亡率的测定 | 第48-49页 |
| ·降糖实验 | 第49-50页 |
| ·双乙酰的测定 | 第50页 |
| ·酒精度、原浓、真浓的测定 | 第50页 |
| ·风味物质的测定 | 第50-52页 |
| 第四章 讨论 | 第52-53页 |
| ·引物的设计 | 第52页 |
| ·PCR 反应体系和条件的探讨 | 第52页 |
| ·酶切体系及酶切条件和时间探讨 | 第52页 |
| ·转化子的筛选和遗传稳定性的探讨 | 第52-53页 |
| 第五章 结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 附录1：ADH1 的基因序列 | 第57-61页 |
| 附录 2 PCR 产物测序结果 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
