| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-30页 |
| ·果实内可溶性糖及相关酶 | 第14-18页 |
| ·山梨醇 | 第14页 |
| ·果糖 | 第14-15页 |
| ·葡萄糖 | 第15页 |
| ·蔗糖 | 第15-16页 |
| ·6-磷酸山梨醇脱氢酶 | 第16页 |
| ·山梨醇脱氢酶 | 第16-17页 |
| ·山梨醇氧化酶 | 第17页 |
| ·蔗糖转化酶 | 第17-18页 |
| ·蔗糖磷酸合成酶 | 第18页 |
| ·蔗糖合成酶 | 第18页 |
| ·植物糖代谢与酶调节 | 第18-21页 |
| ·山梨醇代谢 | 第19-20页 |
| ·蔗糖代谢 | 第20页 |
| ·己糖的代谢 | 第20-21页 |
| ·果实品质与糖组分关系 | 第21页 |
| ·可溶性糖的分离与含量检测 | 第21-22页 |
| ·山梨醇脱氢酶原核表达研究进展 | 第22-25页 |
| ·研究现状 | 第22-23页 |
| ·山梨醇脱氢酶的氨基酸序列 | 第23-24页 |
| ·基因克隆常用方法 | 第24-25页 |
| ·RACE 技术 | 第24页 |
| ·应用 cDNA 差示分析法克隆基因 | 第24页 |
| ·Gateway 大规模克隆技术 | 第24-25页 |
| ·基因的图位克隆法 | 第25页 |
| ·克隆技术的应用及意义 | 第25页 |
| ·S-亚硝基化 | 第25-28页 |
| ·一氧化氮 | 第25-26页 |
| ·NO 与生物代谢 | 第26-27页 |
| ·蛋白质的 S-亚硝基化 | 第27-28页 |
| ·论文研究内容及意义 | 第28-30页 |
| 2 材料方法 | 第30-48页 |
| ·样品处理 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-48页 |
| ·NO 对桃果实内糖组分含量及相关酶活性的影响 | 第30-35页 |
| ·可溶性糖的提取及含量测定 | 第30-31页 |
| ·可滴定酸的提取及含量测定 | 第31页 |
| ·糖及糖醇的提取及含量测定 | 第31页 |
| ·山梨醇脱氢酶的提取及活性测定 | 第31-32页 |
| ·山梨醇氧化酶的提取及活性测定 | 第32页 |
| ·转化酶的提取及活性测定 | 第32-33页 |
| ·蔗糖磷酸合成酶的提取及活性测定 | 第33-34页 |
| ·蔗糖合成酶的提取及活性测定 | 第34-35页 |
| ·HPLC-ELSD 分离并检测糖含量方法的研究 | 第35-36页 |
| ·仪器试剂 | 第35页 |
| ·标准样品溶液的配制 | 第35页 |
| ·样品前处理 | 第35-36页 |
| ·色谱条件和 ELSD 参数 | 第36页 |
| ·线性回归方程、检测限 | 第36页 |
| ·精密度 | 第36页 |
| ·山梨醇脱氢酶(SDH)重组蛋白的体外表达及纯化 | 第36-44页 |
| ·果实总 RNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·RNA 反转录 | 第37页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测 SDH 表达 | 第37-38页 |
| ·梯度 PCR | 第38页 |
| ·回收目的 DNA 片段 | 第38-39页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·克隆载体的构建 | 第39-40页 |
| ·小量法提取质粒 | 第40-41页 |
| ·表达载体的构建 | 第41页 |
| ·基因正反向验证 | 第41页 |
| ·SDH 诱导表达 | 第41页 |
| ·SDH 纯化 | 第41-42页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第43-44页 |
| ·NO 对山梨醇脱氢酶的抑制动力学研究 | 第44-48页 |
| ·NO 饱和溶液的制备 | 第44页 |
| ·NO 对 SDH 最适反应温度的影响 | 第44页 |
| ·NO 对 SDH 最适反应 pH 的影响 | 第44页 |
| ·NO 对 SDH 最适反应底物浓度的影响 | 第44-45页 |
| ·NO 浓度对 SDH 活性的影响 | 第45页 |
| ·NO 对 SDH 荧光强度的影响 | 第45页 |
| ·酶促动力学参数 | 第45页 |
| ·圆二色性分析 NO 对 SDH 空间结构的影响 | 第45页 |
| ·定点突变 | 第45-47页 |
| ·催化域突变对活性的影响 | 第47-48页 |
| 3 结果分析 | 第48-71页 |
| ·NO 对桃果实内糖组分含量及相关酶活性的影响 | 第48-53页 |
| ·NO 处理对桃果实可溶性糖及糖酸比的影响 | 第48-49页 |
| ·NO 处理对桃果实糖及糖醇组分及含量的影响 | 第49-50页 |
| ·NO 处理对桃果实山梨醇脱氢酶的影响 | 第50页 |
| ·NO 处理对桃果实山梨醇氧化酶的影响 | 第50页 |
| ·NO 处理对桃果实转化酶的影响 | 第50-51页 |
| ·NO 处理对桃果实蔗糖磷酸合成酶的影响 | 第51-52页 |
| ·NO 处理对桃果实蔗糖合成酶的影响 | 第52-53页 |
| ·HPLC-ELSD 分离糖类物质的探讨 | 第53-61页 |
| ·色谱分离条件的选择 | 第53-56页 |
| ·色谱检测条件的选择 | 第56-58页 |
| ·线性回归方程、相关系数及检出限 | 第58-59页 |
| ·方法的回收率及精密度 | 第59页 |
| ·肥城桃果实内糖含量 | 第59-60页 |
| ·NO 处理时间对肥城桃果实糖含量的影响 | 第60-61页 |
| ·山梨醇脱氢酶(SDH)重组蛋白的体外表达及纯化 | 第61-65页 |
| ·桃果实 SDH 同源基因的克隆 | 第61-62页 |
| ·构建克隆载体 | 第62-63页 |
| ·SDH 原核表达及纯化 | 第63-64页 |
| ·酶活检测 | 第64-65页 |
| ·SDH 基因在肥城桃果实不同生长期的表达 | 第65页 |
| ·NO 对山梨醇脱氢酶的抑制动力学研究 | 第65-71页 |
| ·最适反应温度的确定 | 第65-66页 |
| ·最适反应 pH 的确定 | 第66页 |
| ·最适底物浓度的确定 | 第66-67页 |
| ·NO 对 SDH 荧光强度的影响 | 第67页 |
| ·米氏常数的确定 | 第67-69页 |
| ·NO 对 SDH 空间构象的影响 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-78页 |
| ·NO 处理对桃果实中贮藏期间糖类物质积累的影响 | 第71页 |
| ·NO 处理对桃果实中贮藏期间糖代谢相关酶活性的影响 | 第71-73页 |
| ·HPLC-ELSD 分析方法在糖类物质分离中的应用 | 第73页 |
| ·SDH 蛋白的表达及纯化 | 第73-74页 |
| ·NO 与 SDH 相互作用的动力学 | 第74-78页 |
| 5 结论 | 第78-79页 |
| 本论文的创新点 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第93页 |