| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 1 引言 | 第10-24页 |
| ·立题背景及意义 | 第10-11页 |
| ·本文所涉及的食源性致病菌 | 第11-14页 |
| ·金黄色葡萄球菌 | 第11-12页 |
| ·沙门氏菌 | 第12-13页 |
| ·蜡样芽胞杆菌 | 第13-14页 |
| ·食源性致病菌检测技术的研究进展 | 第14-22页 |
| ·传统的检测方法 | 第14-15页 |
| ·免疫学检测方法 | 第15-17页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第17-22页 |
| ·本研究中三种致病菌靶基因的选择 | 第22-23页 |
| ·金黄色葡萄球菌nuc 基因 | 第22页 |
| ·沙门氏菌invA 基因 | 第22页 |
| ·蜡样芽胞杆菌hblA 基因 | 第22-23页 |
| ·本文研究目的及研究内容 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-32页 |
| ·试验材料与设备 | 第24-26页 |
| ·试验菌株 | 第24页 |
| ·仪器与设备 | 第24-25页 |
| ·主要培养基 | 第25页 |
| ·样品与生化试剂 | 第25-26页 |
| ·试验方法 | 第26-32页 |
| ·致病菌的培养 | 第26页 |
| ·致病菌基因组DNA 的提取 | 第26页 |
| ·多重PCR 靶基因的选择 | 第26页 |
| ·多重PCR 引物设计 | 第26-27页 |
| ·多重PCR 反应条件的优化 | 第27-28页 |
| ·多重PCR 反应特异性 | 第28页 |
| ·多重PCR 反应产物检测 | 第28页 |
| ·多重PCR 反应产物胶回收 | 第28-29页 |
| ·多重PCR 反应产物测序鉴定 | 第29页 |
| ·多重PCR 反应灵敏度检测 | 第29页 |
| ·人工污染纯牛奶DNA 模板提取方法的比较 | 第29-31页 |
| ·人工污染纯牛奶，确定检出限 | 第31页 |
| ·多重 PCR 方法与国标方法进行实际样品检测对比试验 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-45页 |
| ·多重PCR 反应条件的优化结果 | 第32-37页 |
| ·最适退火温度的选择 | 第32-33页 |
| ·最适M92+(25 mM)添加量的选择 | 第33页 |
| ·Taq 酶(5.0 U/μL)添加量的优化 | 第33-34页 |
| ·最适dNTP mixture(各2.5 mM)添加量的选择 | 第34页 |
| ·多重PCR 反应循环数的选择 | 第34-35页 |
| ·多重PCR 反应的热启动与冷启动比较 | 第35-37页 |
| ·多重PCR 特异性试验 | 第37-38页 |
| ·多重PCR 引物特异性 | 第37-38页 |
| ·多重PCR 反应特异性 | 第38页 |
| ·多重PCR 反应产物测序结果 | 第38-40页 |
| ·多重PCR 反应灵敏度的检测 | 第40-42页 |
| ·多重PCR 检测单一致病菌的灵敏度 | 第40-41页 |
| ·多重PCR 同时检测三种致病菌的灵敏度 | 第41-42页 |
| ·人工污染纯牛奶DNA 模板提取方法的比较 | 第42-43页 |
| ·人工污染纯牛奶，确定检出限 | 第43-44页 |
| ·实际样品的检测结果 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-49页 |
| ·多重PCR 反应影响因素 | 第45-46页 |
| ·靶基因及引物的确定 | 第45页 |
| ·dNTPs 和Taq 酶及镁离子添加量的确定 | 第45-46页 |
| ·退火温度及循环数的确定 | 第46页 |
| ·DNA 模板的制备方法比较 | 第46页 |
| ·与国标检测方法的比较 | 第46-47页 |
| ·多重PCR 反应污染的防控 | 第47-48页 |
| ·展望 | 第48-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 硕士期间发表学术论文 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |