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低产高级醇酿酒酵母菌株的构建及应用研究

摘要第4-5页
ABSTRACT第5-6页
1 前言第9-20页
    1.1 黄酒概述第9页
    1.2 黄酒风味物质概述第9-11页
        1.2.1 高级醇对黄酒风味的影响第10页
        1.2.2 酯类对黄酒风味的影响第10-11页
        1.2.3 酸对黄酒风味的影响第11页
    1.3 黄酒发酵过程中高级醇的形成与控制第11-16页
        1.3.1 高级醇的形成机理第11-14页
        1.3.2 影响黄酒中高级醇含量的主要因素第14-16页
        1.3.3 降低黄酒中高级醇含量的主要措施第16页
    1.4 低产高级醇酵母菌株的研究进展第16-18页
        1.4.1 诱变育种第16-17页
        1.4.2 细胞融合育种第17页
        1.4.3 基因工程育种第17-18页
    1.5 本课题的立题依据及研究内容第18-20页
        1.5.1 本课题的立体依据第18-19页
        1.5.2 本课题的主要研究内容第19-20页
2 材料与方法第20-41页
    2.1 实验材料第20-26页
        2.1.1 菌株及质粒第20-21页
        2.1.2 主要仪器第21-22页
        2.1.3 主要试剂第22-23页
        2.1.4 主要培养基第23-24页
        2.1.5 主要溶液第24-26页
    2.2 分析方法第26-28页
        2.2.1 CO_2排放量的测定第26页
        2.2.2 酒精度测定第26页
        2.2.3 还原糖的测定第26-27页
        2.2.4 总酸的测定第27页
        2.2.5 乙酸和乳酸的测定第27页
        2.2.6 高级醇的测定第27-28页
    2.3 实验方法第28-41页
        2.3.1 引物设计第28-30页
        2.3.2 目的基因片段的获得第30-35页
        2.3.3 酵母转化第35-38页
        2.3.4 单倍体的制备及分离第38-39页
        2.3.5 生长曲线的测定第39页
        2.3.6 发酵实验第39-41页
3 结果与讨论第41-73页
    3.1 终止子和亲本菌株的选择第41-53页
        3.1.1 不同强度终止子的选择第41-46页
        3.1.2 亲本菌株的选择第46-49页
        3.1.3 亲本菌株单倍体的制备和筛选第49-53页
        3.1.4 小结第53页
    3.2 低产高级醇酿酒酵母菌株的构建第53-66页
        3.2.0 无痕基因敲除流程第53页
        3.2.1 敲除BAT2基因菌株的构建第53-55页
        3.2.2 梯度过表达ALD6基因同时敲除BAT2基因对高级醇含量的影响第55-62页
        3.2.3 低产高级醇双倍体重组菌株的获得第62-66页
        3.2.4 小结第66页
    3.3 发酵工艺的优化第66-73页
        3.3.1 酵母接种量对黄酒高级醇含量的影响第66-67页
        3.3.2 发酵时间对黄酒高级醇含量的影响第67-69页
        3.3.3 发酵温度对黄酒高级醇含量的影响第69-70页
        3.3.4 大曲添加量对黄酒高级醇含量的影响第70-72页
        3.3.5 小结第72-73页
4 结论第73-74页
    4.1 全文总结第73页
    4.2 论文的创新点第73页
    4.3 论文的不足之处第73-74页
5 展望第74-75页
6 参考文献第75-81页
7 攻读硕士学位期间发表论文情况第81-82页
8 致谢第82页

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