| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第7-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 河弧菌概况 | 第12-15页 |
| 1.1.1 河弧菌的发现及生物学特性 | 第12页 |
| 1.1.2 河弧菌的致病性 | 第12-13页 |
| 1.1.3 河弧菌的外环境分布与存活 | 第13页 |
| 1.1.4 河弧菌的流行概况 | 第13页 |
| 1.1.5 河弧菌的检测方法 | 第13-15页 |
| 1.1.6 河弧菌血清分型 | 第15页 |
| 1.2 脂多糖概述 | 第15-18页 |
| 1.2.1 脂多糖分子结构 | 第15-17页 |
| 1.2.2 脂多糖的提取 | 第17页 |
| 1.2.3 脂多糖的纯化与鉴定 | 第17-18页 |
| 1.2.4 根据细菌O-抗原的血清分型方法 | 第18页 |
| 1.3 单域重链抗体技术研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3.1 纳米抗体 | 第18-19页 |
| 1.3.2 纳米抗体特性 | 第19-20页 |
| 1.3.3 纳米抗体技术的应用 | 第20页 |
| 1.4 本课题研究内容和意义 | 第20-22页 |
| 第2章 河弧菌全菌抗原中脂多糖纳米抗体的淘选与鉴定 | 第22-35页 |
| 2.1 主要实验材料 | 第22页 |
| 2.2 主要设备 | 第22-23页 |
| 2.3 主要试剂及培养基 | 第23-24页 |
| 2.4 河弧菌菌体表面O抗原的液相亲和淘选与鉴定 | 第24-29页 |
| 2.4.1 河弧菌菌液抗原的制备 | 第24页 |
| 2.4.2 河弧菌菌液抗原的液相淘选 | 第24-25页 |
| 2.4.3 洗脱噬菌体的扩增与纯化 | 第25-26页 |
| 2.4.4 结合噬菌体及其扩增产物的滴度测定 | 第26页 |
| 2.4.5 噬菌体阳性克隆的筛选与鉴定 | 第26-29页 |
| 2.5 实验结果 | 第29-33页 |
| 2.5.1 淘选过程噬菌体富集监控 | 第29页 |
| 2.5.2 Phage-ELISA鉴定阳性噬菌体克隆 | 第29-32页 |
| 2.5.3 不同血清型的河弧菌进行噬菌体ELISA交叉试验鉴定阳性克隆..212.5.4 阳性克隆的序列分析 | 第32-33页 |
| 2.6 讨论 | 第33-34页 |
| 2.6.1 噬菌体展示技术与纳米抗体的运用 | 第33页 |
| 2.6.2 河弧菌的液相生物淘选技术 | 第33-34页 |
| 2.7 小结 | 第34-35页 |
| 第3章 抗河弧菌纳米抗体的表达与活性鉴定 | 第35-44页 |
| 3.1 主要实验材料 | 第35页 |
| 3.2 主要设备 | 第35-36页 |
| 3.3 主要试剂及配置 | 第36-37页 |
| 3.4 抗河弧菌纳米抗体的重组质粒pET-25b-2E3提取 | 第37页 |
| 3.5 大肠杆菌BL21感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| 3.6 抗河弧菌纳米抗体的表达、纯化与活性鉴定 | 第38-41页 |
| 3.6.1 河弧菌纳米抗体的表达 | 第38-39页 |
| 3.6.2 聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）检测抗体蛋白的表达 | 第39-40页 |
| 3.6.3 纳米抗体的镍柱纯化 | 第40页 |
| 3.6.4 纳米抗体的活性鉴定 | 第40-41页 |
| 3.7 实验结果 | 第41-43页 |
| 3.7.1 目的蛋白的表达 | 第41-42页 |
| 3.7.3 纳米抗体的活性分析 | 第42-43页 |
| 3.8 讨论与小结 | 第43-44页 |
| 3.8.1 讨论 | 第43页 |
| 3.8.2 小结 | 第43-44页 |
| 第4章 脂多糖O-抗原的纳米抗体的固相亲和淘选 | 第44-56页 |
| 4.1 实验试剂与仪器 | 第44页 |
| 4.2 不同血清型的河弧菌脂多糖的提取、纯化与鉴定 | 第44-47页 |
| 4.2.1 脂多糖的提取 | 第44-45页 |
| 4.2.2 粗制脂多糖的纯化 | 第45页 |
| 4.2.3 SDS-PAGE电泳以及银染鉴定脂多糖 | 第45-46页 |
| 4.2.4 对提取液中脂多糖纯度进行鉴定 | 第46-47页 |
| 4.3 抗O-抗原纳米抗体的固相淘选与鉴定 | 第47-48页 |
| 4.3.1 抗脂多糖纳米抗体的噬菌体淘选（淘选条件如表 4-2） | 第47页 |
| 4.3.2 洗脱噬菌体的扩增与纯化 | 第47页 |
| 4.3.3 结合噬菌体及其扩增产物滴度测定 | 第47页 |
| 4.3.4 噬菌体阳性克隆的筛选与鉴定 | 第47-48页 |
| 4.3.5 脂多糖与噬菌体阳性克隆的ELISA交叉试验 | 第48页 |
| 4.3.6 抗原与噬菌体ELISA交叉试验鉴定阳性克隆 | 第48页 |
| 4.3.7 阳性克隆测序 | 第48页 |
| 4.4 实验结果 | 第48-55页 |
| 4.4.1 脂多糖提取液中对脂多糖成分进行鉴定 | 第48-49页 |
| 4.4.2 对提取液中脂多糖的纯度进行鉴定 | 第49-50页 |
| 4.4.3 淘选过程噬菌体富集监控 | 第50-51页 |
| 4.4.4 Phage-ELISA鉴定阳性噬菌体克隆 | 第51-53页 |
| 4.4.5 抗原与噬菌体ELISA交叉试验鉴定阳性克隆 | 第53-54页 |
| 4.4.6 阳性克隆的序列分析 | 第54-55页 |
| 4.5 讨论与小结 | 第55-56页 |
| 4.5.1 讨论 | 第55页 |
| 4.5.2 小结 | 第55-56页 |
| 第5章 结果与展望 | 第56-57页 |
| 5.1 主要研究结果 | 第56页 |
| 5.2 进一步工作方向 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
