| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-24页 |
| ·食物过敏 | 第12-13页 |
| ·食物过敏的概念 | 第12页 |
| ·食物过敏的危害 | 第12-13页 |
| ·食物过敏的免疫学机制 | 第13页 |
| ·牛乳过敏 | 第13-22页 |
| ·CMA的诊断 | 第13-15页 |
| ·暂时性CMA和持续性CMA的预测 | 第15-17页 |
| ·CMA的治疗 | 第17-20页 |
| ·牛乳过敏原表位与牛乳过敏 | 第20-22页 |
| ·立题背景与研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 牛乳中α-乳白蛋白的分离纯化 | 第24-34页 |
| ·材料与设备 | 第24-25页 |
| ·试剂与材料 | 第24页 |
| ·设备 | 第24-25页 |
| ·溶液配制 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-28页 |
| ·牛乳脱脂 | 第26页 |
| ·等电点沉淀酪蛋白 | 第26页 |
| ·超滤浓缩 | 第26页 |
| ·牛乳α-乳白蛋白的分离纯化 | 第26-27页 |
| ·SDS-PAGE检测所分离蛋白及其纯度 | 第27页 |
| ·Lowry法测定蛋白质浓度 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-31页 |
| ·离子交换层析初步分离牛乳α-乳白蛋白 | 第28-29页 |
| ·凝胶层析进一步纯化牛乳α-乳白蛋白 | 第29-30页 |
| ·纯化过程中蛋白质含量的变化 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| ·离子交换层析条件的选择 | 第31-32页 |
| ·关于凝胶层析 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第三章 抗牛乳α-乳白蛋白多克隆抗体的制备及交叉反应性的研究 | 第34-43页 |
| ·材料与设备 | 第34-35页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·仪器与耗材 | 第34-35页 |
| ·溶液配制 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·实验动物 | 第35-36页 |
| ·抗原制备 | 第36页 |
| ·免疫方案 | 第36页 |
| ·免疫效果监测 | 第36页 |
| ·方正滴定确定间接ELISA条件 | 第36页 |
| ·间接ELISA测抗体效价 | 第36-37页 |
| ·间接ELISA检测抗血清与其它蛋白的免疫交叉反应 | 第37页 |
| ·免疫印迹检测抗血清与其它来源乳白蛋白的交叉反应 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-40页 |
| ·最佳包被抗原浓度与二抗稀释倍数的确定 | 第37-38页 |
| ·免疫过程中抗体效价的变化 | 第38-39页 |
| ·间接ELISA检测牛乳α-乳白蛋白与其它蛋白之间的免疫交叉反应 | 第39页 |
| ·免疫印迹检测牛乳α-乳白蛋白与其它来源乳白蛋白的交叉反应 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| ·免疫动物的选择 | 第40-41页 |
| ·抗原纯度 | 第41页 |
| ·佐剂 | 第41页 |
| ·免疫剂量及免疫途径 | 第41页 |
| ·兔对牛乳α-乳白蛋白的免疫应答 | 第41-42页 |
| ·抗血清的特异性 | 第42页 |
| ·抗血清与其它来源乳白蛋白的交叉反应 | 第42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第四章 亲和纯化抗牛乳α-乳白蛋白特异性抗体 | 第43-51页 |
| ·材料与设备 | 第43-44页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·仪器与耗材 | 第43页 |
| ·溶液配制 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-45页 |
| ·牛乳α-乳白蛋白Sepharose 4B免疫亲和柱的制备 | 第44页 |
| ·亲和纯化 | 第44-45页 |
| ·间接ELISA法检测纯化前后抗体效价的变化 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测纯度 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-48页 |
| ·亲和层析洗脱过程中蛋白含量的变化 | 第45-46页 |
| ·亲和纯化过程中蛋白质含量和抗体效价的变化 | 第46-47页 |
| ·纯化前后样品的SDS-PAGE电泳图 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| ·配体的选择 | 第48-49页 |
| ·载体的选择 | 第49页 |
| ·关于牛乳α-乳白蛋白Sepharose 4B柱的制备 | 第49-50页 |
| ·关于亲和层析的条件 | 第50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第五章 噬菌体展示技术筛选牛乳α-乳白蛋白IgG结合表位 | 第51-65页 |
| ·材料与设备 | 第51-53页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·仪器与耗材 | 第51-52页 |
| ·溶液配制 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·菌种的保存与活化 | 第53页 |
| ·噬菌体肽库淘选 | 第53-54页 |
| ·噬菌体滴度测定 | 第54页 |
| ·洗脱物的扩增及滴度测定 | 第54-55页 |
| ·结合克隆的特征鉴定 | 第55-56页 |
| ·线性及构象型表位位点的确定 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-61页 |
| ·亲和淘选过程中噬菌体的富集效果 | 第56-58页 |
| ·阳性克隆提取的DNA电泳图 | 第58页 |
| ·阳性克隆测序结果 | 第58-59页 |
| ·线性表位 | 第59-61页 |
| ·构象型表位 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-64页 |
| ·关于噬菌体随机肽库筛选 | 第61-62页 |
| ·关于牛乳α-乳白蛋白线性表位 | 第62-63页 |
| ·关于线性表位与交叉反应 | 第63-64页 |
| ·关于构象型表位 | 第64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第六章 结论与展望 | 第65-66页 |
| ·结论 | 第65页 |
| ·展望 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 硕士期间研究成果 | 第75-76页 |
| 附录A | 第76-77页 |
| 附录B | 第77-78页 |
