| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| 1.1 鳕鱼加工副产物利用现状 | 第12-13页 |
| 1.2 生物活性肽 | 第13-16页 |
| 1.2.1 生物活性肽的定义 | 第13页 |
| 1.2.2 生物活性肽的功能 | 第13-15页 |
| 1.2.2.1 抗高血压 | 第13页 |
| 1.2.2.2 抗氧化 | 第13-14页 |
| 1.2.2.3 抗凝血 | 第14页 |
| 1.2.2.4 钙螯合 | 第14页 |
| 1.2.2.5 抗菌 | 第14-15页 |
| 1.2.2.6 其他生理功能 | 第15页 |
| 1.2.3 生物活性肽的制备 | 第15-16页 |
| 1.3 钙与补钙剂 | 第16-19页 |
| 1.3.1 钙与钙的生理功能 | 第16页 |
| 1.3.2 钙的摄取与吸收 | 第16-17页 |
| 1.3.3 补钙剂的种类 | 第17-18页 |
| 1.3.4 小肠吸收钙的途径 | 第18-19页 |
| 1.4 体外模型—Caco-2 细胞 | 第19-20页 |
| 1.5 研究进展 | 第20-21页 |
| 1.6 本课题的意义和主要研究内容 | 第21-22页 |
| 1.6.1 本课题的意义 | 第21页 |
| 1.6.2 主要研究内容 | 第21-22页 |
| 1.7 实验思路 | 第22-23页 |
| 第二章 产蛋白酶菌株的筛选与蛋白酶的制备 | 第23-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-26页 |
| 2.1.1 材料与仪器 | 第23页 |
| 2.1.1.1 材料与试剂 | 第23页 |
| 2.1.1.2 仪器与设备 | 第23页 |
| 2.1.2 产蛋白酶菌株的筛选 | 第23-24页 |
| 2.1.2.1 初筛 | 第23-24页 |
| 2.1.2.2 复筛 | 第24页 |
| 2.1.2.3 蛋白酶活的测定 | 第24页 |
| 2.1.3 产蛋白酶菌株的鉴定 | 第24页 |
| 2.1.3.1 形态特征观察 | 第24页 |
| 2.1.3.2 菌株分子生物学鉴定 | 第24页 |
| 2.1.4 蛋白酶的制备 | 第24-25页 |
| 2.1.4.1 生长曲线和酶活曲线的测定 | 第24-25页 |
| 2.1.4.2 蛋白酶发酵液的制备 | 第25页 |
| 2.1.4.3 粗酶的制备 | 第25页 |
| 2.1.4.4 蛋白酶分子量的测定 | 第25页 |
| 2.1.5 蛋白酶酶学性质的初步研究 | 第25-26页 |
| 2.1.5.1 温度对酶活性和稳定性的影响 | 第25页 |
| 2.1.5.2 pH对酶活性和稳定性的影响 | 第25页 |
| 2.1.5.3 金属离子对酶活性的影响 | 第25-26页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第26-32页 |
| 2.2.1 菌株的筛选 | 第26-27页 |
| 2.2.1.1 初筛 | 第26页 |
| 2.2.1.2 复筛 | 第26-27页 |
| 2.2.2 菌株鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.2.1 菌株的形态学观察 | 第27-28页 |
| 2.2.2.2 16S rDNA测序 | 第28页 |
| 2.2.3 蛋白酶的制备 | 第28-30页 |
| 2.2.3.1 菌株生长与产酶曲线 | 第28-29页 |
| 2.2.3.2 分子量的测定 | 第29-30页 |
| 2.2.4 蛋白酶学性质的初步测定 | 第30-32页 |
| 2.2.4.1 温度对蛋白酶活性和稳定性的影响 | 第30-31页 |
| 2.2.4.2 pH对蛋白酶活性和稳定性的影响 | 第31-32页 |
| 2.2.4.3 金属离子对蛋白酶活性的影响 | 第32页 |
| 2.3 本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 太平洋真鳕碎肉多肽的制备 | 第33-46页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-35页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第33页 |
| 3.1.2 主要设备 | 第33页 |
| 3.1.3 试验方法 | 第33-35页 |
| 3.1.3.1 基本成分的测定 | 第33页 |
| 3.1.3.2 太平洋真鳕碎肉水解 | 第33-34页 |
| 3.1.3.3 水解度的测定 | 第34页 |
| 3.1.3.4 可溶性钙结合量的测定 | 第34页 |
| 3.1.3.5 酶解体系的选择 | 第34页 |
| 3.1.3.6 单因素试验 | 第34-35页 |
| 3.1.3.7 响应面试验设计 | 第35页 |
| 3.1.3.8 多肽分子量的测定 | 第35页 |
| 3.2 结果 | 第35-44页 |
| 3.2.1 太平洋真鳕碎肉的基本成分 | 第35-36页 |
| 3.2.2 复合酶的筛选 | 第36页 |
| 3.2.3 单因素试验结果 | 第36-40页 |
| 3.2.3.1 温度对水解度和可溶性钙结合量的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.3.2 水解时间对水解度和可溶性钙结合量的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.3.3 pH对水解度和可溶性钙结合量的影响 | 第38页 |
| 3.2.3.4 加酶量对水解度和可溶性钙结合量的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.3.5 料液比对水解度和可溶性钙结合量的影响 | 第39页 |
| 3.2.3.6 两酶比对水解度和可溶性钙结合量的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.4 Box-Behnken中心组合优化设计结果与响应面分析 | 第40-43页 |
| 3.2.4.1 多元二次回归方程的建立、检验及显著性分析 | 第40-42页 |
| 3.2.4.2 响应面分析 | 第42-43页 |
| 3.2.4.3 响应面优化与验证 | 第43页 |
| 3.2.5 太平洋真鳕碎肉多肽分子量分布 | 第43-44页 |
| 3.3 本章小结 | 第44-46页 |
| 第四章 太平洋真鳕碎肉肽钙复合物的制备及稳定性分析 | 第46-59页 |
| 4.1 材料与方法 | 第46-48页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第46页 |
| 4.1.2 仪器与设备 | 第46页 |
| 4.1.3 试验方法 | 第46-48页 |
| 4.1.3.1 太平洋真鳕碎肉肽钙复合物的制备工艺 | 第46页 |
| 4.1.3.2 乙醇浓度的确定 | 第46-47页 |
| 4.1.3.3 螯合率的测定 | 第47页 |
| 4.1.3.4 单因素试验设计 | 第47页 |
| 4.1.3.5 响应面法优化螯合工艺 | 第47页 |
| 4.1.3.6 傅里叶红外光谱(FT-IR)分析 | 第47-48页 |
| 4.1.3.7 太平洋真鳕碎肉肽钙复合物在体外胃肠模拟体系中的稳定性 | 第48页 |
| 4.1.3.8 太平洋真鳕碎肉肽钙复合物在不同pH介质中的稳定性 | 第48页 |
| 4.1.3.9 太平洋真鳕碎肉肽钙复合物在磷酸盐介质中的稳定性 | 第48页 |
| 4.1.3.10 太平洋真鳕碎肉肽钙复合物在乳糖和氯化钠介质中的稳定性 | 第48页 |
| 4.2 结果与分析 | 第48-58页 |
| 4.2.1 乙醇终浓度的确定 | 第48-49页 |
| 4.2.2 单因素试验结果与分析 | 第49-51页 |
| 4.2.2.1 太平洋真鳕碎肉多肽与氯化钙质量比对螯合率的影响 | 第49-50页 |
| 4.2.2.2 反应温度对螯合率的影响 | 第50页 |
| 4.2.2.3 介质pH对螯合率的影响 | 第50-51页 |
| 4.2.2.4 反应时间对螯合率的影响 | 第51页 |
| 4.2.3 响应面试验结果与分析 | 第51-54页 |
| 4.2.3.1 响应面的建立 | 第51-53页 |
| 4.2.3.2 响应面分析与验证 | 第53-54页 |
| 4.2.5 傅里叶红外光谱(FT-IR)分析 | 第54-55页 |
| 4.2.6 太平洋真鳕碎肉肽钙复合物在体外胃肠模拟体系中的稳定性 | 第55页 |
| 4.2.7 太平洋真鳕碎肉肽钙复合物在不同pH中的稳定性 | 第55-56页 |
| 4.2.8 太平洋真鳕碎肉肽钙复合物在磷酸盐溶液中的稳定性 | 第56-57页 |
| 4.2.9 鳕鱼肽钙复合物在乳糖和氯化钠中的稳定性 | 第57-58页 |
| 4.3 本章小结 | 第58-59页 |
| 第五章 太平洋真鳕碎肉肽钙复合物对Caco-2 细胞钙转运吸收的影响 | 第59-64页 |
| 5.1 材料和方法 | 第59-60页 |
| 5.1.1 材料与试剂 | 第59页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第59页 |
| 5.1.2.1 细胞培养 | 第59页 |
| 5.1.2.2 建立肠黏膜屏障体外模型 | 第59页 |
| 5.1.3 模型的检测与鉴定 | 第59-60页 |
| 5.1.3.1 单层细胞跨膜电阻测定 | 第59-60页 |
| 5.1.3.2 碱性磷酸酶活性检测 | 第60页 |
| 5.1.4 金属离子的转化与滞留 | 第60页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第60-62页 |
| 5.2.1 TEER值的测定 | 第60页 |
| 5.2.2 碱性磷酸酶活性的测定 | 第60-61页 |
| 5.2.3 钙转运吸收的测定 | 第61-62页 |
| 5.3 本章小结 | 第62-64页 |
| 第六章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 6.1 结论 | 第64-65页 |
| 6.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
