| 摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第20-46页 |
| 1 国内外研究进展 | 第20-42页 |
| 1.1 茯砖茶及其加工工艺 | 第20-21页 |
| 1.2 茯砖茶中微生物的分离鉴定 | 第21-23页 |
| 1.3 DGGE技术及其在菌群结构和动态解析中应用 | 第23-28页 |
| 1.3.1 真菌的rDNA基因簇 | 第23页 |
| 1.3.2 细菌16S rRNA的特征 | 第23-24页 |
| 1.3.3 DGGE的原理特征与数据分析 | 第24-26页 |
| 1.3.4 DGGE技术在食品真菌区系分析中应用 | 第26-27页 |
| 1.3.5 PCR-DGGE技术的优化策略 | 第27-28页 |
| 1.4 MLST技术及其在真菌菌种鉴定中应用 | 第28-30页 |
| 1.5 散囊菌属的生态分布及其次级代谢物 | 第30-34页 |
| 1.6 膳食-肠道菌群-宿主间相互作用 | 第34-40页 |
| 1.6.1 肠道菌群的类群及其生理功能 | 第34-36页 |
| 1.6.2 肠道菌群与宿主能量代谢的关系 | 第36-38页 |
| 1.6.3 膳食和肠道疾病影响肠道菌群结构 | 第38-40页 |
| 1.7 肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻与茶叶干预研究 | 第40-42页 |
| 2 研究的目的和意义 | 第42-43页 |
| 3 研究内容及关键技术 | 第43-46页 |
| 3.1 研究内容 | 第43-45页 |
| 3.1.1 茯砖茶发酵过程和产品中真菌菌群结构特性 | 第43-44页 |
| 3.1.2 茯砖茶发酵相关优势真菌的分离鉴定 | 第44页 |
| 3.1.3 茯砖茶中蒽醌类物质的特性 | 第44页 |
| 3.1.4 茯砖茶汁对肠出血性大肠杆菌0157:H7感染性腹泻小鼠的干预作用 | 第44-45页 |
| 3.1.5 冠突散囊菌的安全性评价和对肠道菌群结构的影响 | 第45页 |
| 3.2 关键技术 | 第45-46页 |
| 第二章 茯砖茶中真菌菌群结构的解析 | 第46-69页 |
| 1 材料与方法 | 第46-59页 |
| 1.1 实验材料 | 第46-55页 |
| 1.1.1 菌株 | 第46页 |
| 1.1.2 茶叶样品 | 第46-47页 |
| 1.1.3 培养基 | 第47-49页 |
| 1.1.4 茶叶样品总DNA提取相关试剂 | 第49页 |
| 1.1.5 DNA琼脂糖电泳相关试剂 | 第49-50页 |
| 1.1.6 PCR相关试剂 | 第50页 |
| 1.1.7 DGGE相关试剂 | 第50-52页 |
| 1.1.8 聚丙烯酰胺凝胶中DNA条带回收相关试剂 | 第52-53页 |
| 1.1.9 PCR产物的克隆转化相关试剂 | 第53页 |
| 1.1.10 质粒提取相关试剂 | 第53-54页 |
| 1.1.11 仪器设备 | 第54-55页 |
| 1.1.12 软件及数据库 | 第55页 |
| 1.2 技术路线 | 第55-56页 |
| 1.3 研究方法 | 第56-59页 |
| 1.3.1 茯砖茶发酵过程的理化性质分析 | 第56页 |
| 1.3.2 茯砖茶样品中真菌的分离计数 | 第56-57页 |
| 1.3.3 茶叶样品总DNA提取 | 第57页 |
| 1.3.4 茯砖茶中真菌菌群的PCR-DGGE分析 | 第57-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-65页 |
| 2.1 茯砖茶发酵过程的特征分析 | 第59页 |
| 2.2 PCR-DGGE | 第59-65页 |
| 2.2.1 靶标18S rDNA引物(NS1//GCfung5)PCR-DGGE | 第59-62页 |
| 2.2.2 靶标18S rDNA引物(ssu-0817-GC//ssu-1196)PCR-DGGE | 第62-63页 |
| 2.2.3 靶标28S rDNA引物(NL1F-GC//LS2R)PCR-DGGE | 第63-65页 |
| 3 讨论和小结 | 第65-69页 |
| 3.1 讨论 | 第65-68页 |
| 3.2 小结 | 第68-69页 |
| 第三章 茯砖茶中分离的功能菌株鉴定及系统发育分析 | 第69-84页 |
| 1 材料与方法 | 第69-78页 |
| 1.1 实验材料 | 第69-74页 |
| 1.1.1 菌株 | 第69页 |
| 1.1.2 培养基 | 第69-70页 |
| 1.1.3 菌体形态结构显微观察相关试剂 | 第70-71页 |
| 1.1.4 菌体总DNA提取相关试剂 | 第71页 |
| 1.1.5 PCR扩增相关试剂 | 第71页 |
| 1.1.6 PCR扩增产物的克隆转化相关试剂 | 第71页 |
| 1.1.7 质粒提取相关试剂 | 第71-72页 |
| 1.1.8 仪器设备 | 第72-73页 |
| 1.1.9 软件及数据库 | 第73-74页 |
| 1.2 技术路线 | 第74页 |
| 1.3 研究方法 | 第74-78页 |
| 1.3.1 形态学方法鉴定散囊菌 | 第74-75页 |
| 1.3.2 多位点序列分型法鉴定散囊菌 | 第75-76页 |
| 1.3.3 酵母菌的分子鉴定 | 第76-78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-82页 |
| 2.1 形态学方法鉴定散囊菌 | 第78-80页 |
| 2.2 多位点序列分型法鉴定散囊菌 | 第80-81页 |
| 2.3 酵母菌的分子鉴定 | 第81-82页 |
| 3 讨论和小结 | 第82-84页 |
| 3.1 讨论 | 第82-83页 |
| 3.2 小结 | 第83-84页 |
| 第四章 茯砖茶相关样品中蒽醌类物质组分分析 | 第84-92页 |
| 1 材料与方法 | 第84-88页 |
| 1.1 实验材料 | 第84-86页 |
| 1.1.1 菌株 | 第84页 |
| 1.1.2 培养基 | 第84-85页 |
| 1.1.3 黑茶样品 | 第85页 |
| 1.1.4 蒽醌类物质抽提相关试剂 | 第85页 |
| 1.1.5 HPTLC相关试剂 | 第85页 |
| 1.1.6 仪器设备 | 第85-86页 |
| 1.1.7 软件 | 第86页 |
| 1.2 技术路线 | 第86-87页 |
| 1.3 研究方法 | 第87-88页 |
| 1.3.1 样品的制备 | 第87页 |
| 1.3.2 标准对照品溶液的制备 | 第87页 |
| 1.3.3 供试品溶液的制备 | 第87页 |
| 1.3.4 HPTLC分析 | 第87-88页 |
| 2 结果与分析 | 第88-90页 |
| 3 讨论和小结 | 第90-92页 |
| 3.1 讨论 | 第90页 |
| 3.2 小结 | 第90-92页 |
| 第五章 茯砖茶水提物对EHEC O157:H7感染小鼠的干预 | 第92-119页 |
| 1 材料与方法 | 第92-102页 |
| 1.1 实验材料 | 第92-96页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第92页 |
| 1.1.2 菌株 | 第92页 |
| 1.1.3 培养基 | 第92-93页 |
| 1.1.4 茯砖茶样品 | 第93页 |
| 1.1.5 腹泻模型验证试剂盒 | 第93页 |
| 1.1.6 小鼠血液学和组织学分析相关试剂溶液 | 第93页 |
| 1.1.7 小鼠免疫功能分析相关试剂(盒) | 第93页 |
| 1.1.8 小鼠远端结肠的预处理与总DNA的提取相关溶液 | 第93页 |
| 1.1.9 DNA琼脂糖电泳相关试剂 | 第93页 |
| 1.1.10 PCR扩增相关试剂 | 第93-94页 |
| 1.1.11 DGGE分析相关试剂 | 第94页 |
| 1.1.12 PCR扩增产物的克隆转化相关试剂 | 第94页 |
| 1.1.13 质粒提取相关试剂 | 第94-95页 |
| 1.1.14 仪器设备 | 第95-96页 |
| 1.1.15 软件及数据库 | 第96页 |
| 1.2 技术路线 | 第96-97页 |
| 1.3 研究方法 | 第97-102页 |
| 1.3.1 感染性腹泻小鼠模型的建立与检验 | 第97页 |
| 1.3.2 实验动物分组 | 第97-98页 |
| 1.3.3 血液学分析 | 第98页 |
| 1.3.4 组织解剖与分析 | 第98页 |
| 1.3.5 肠粘膜上CD4~+和CD8~+的表达检测 | 第98-99页 |
| 1.3.6 血清溶血素的测定 | 第99页 |
| 1.3.7 单核-巨噬细胞吞噬功能检测 | 第99-100页 |
| 1.3.8 数据统计分析 | 第100页 |
| 1.3.9 小鼠远端结肠的预处理与总DNA的提取 | 第100-101页 |
| 1.3.10 小鼠远端结肠菌群的PCR-DGGE分析 | 第101-102页 |
| 2 结果与分析 | 第102-114页 |
| 2.1 小鼠的一般状况 | 第102页 |
| 2.2 小鼠的组织病理学检查 | 第102-106页 |
| 2.3 小鼠的血液学指标分析 | 第106-107页 |
| 2.3.1 小鼠的血液细胞学指标分析 | 第106页 |
| 2.3.2 小鼠的血液生化学指标分析 | 第106-107页 |
| 2.4 小鼠的免疫学指标分析 | 第107-109页 |
| 3.5 小鼠远端结肠菌群的PCR-DGGE分析 | 第109-114页 |
| 3.5.1 靶标16S rDNAV6-V8区通用引物PCR-DGGE分析 | 第109-110页 |
| 3.5.2 靶标16S rDNA乳酸杆菌属特异引物PCR-DGGE分析 | 第110-111页 |
| 3.5.3 靶标16S rDNA拟杆菌属特异引物PCR-DGGE分析 | 第111-112页 |
| 3.5.4 靶标16S rDNA梭菌属Ⅳ簇特异引物PCR-DGGE分析 | 第112-114页 |
| 3 讨论和小结 | 第114-119页 |
| 3.1 讨论 | 第114-118页 |
| 3.1.1 感染E.coli O157:H7小鼠模型的建立与症状表现 | 第114-115页 |
| 3.1.2 合适剂量茯砖茶水提物对机体0157:H7感染损害有防护和修复作用 | 第115-116页 |
| 3.1.3 O157:H7感染和灌胃茯砖茶汁影响结肠菌群结构 | 第116-118页 |
| 3.2 小结 | 第118-119页 |
| 第六章 冠突散囊菌菌体对小鼠结肠菌群的影响 | 第119-131页 |
| 1 材料与方法 | 第119-123页 |
| 1.1 实验材料 | 第119-121页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第119页 |
| 1.1.2 菌株 | 第119-120页 |
| 1.1.3 培养基 | 第120页 |
| 1.1.4 小鼠远端结肠的预处理与总DNA的提取相关溶液 | 第120页 |
| 1.1.5 DNA琼脂糖电泳相关试剂 | 第120页 |
| 1.1.6 PCR扩增相关试剂 | 第120页 |
| 1.1.7 DGGE相关试剂 | 第120页 |
| 1.1.8 仪器设备 | 第120-121页 |
| 1.1.9 软件 | 第121页 |
| 1.2 技术路线 | 第121-122页 |
| 1.3 研究方法 | 第122-123页 |
| 1.3.1 小鼠急性毒性试验 | 第122页 |
| 1.3.2 30天喂养试验 | 第122-123页 |
| 1.3.3 小鼠远端结肠的预处理与总DNA的提取 | 第123页 |
| 1.3.4 小鼠远端结肠菌群的PCR-DGGE分析 | 第123页 |
| 2 结果与分析 | 第123-125页 |
| 2.1 小鼠急性毒性试验 | 第123-124页 |
| 2.2 30天喂养期间的一般状况 | 第124页 |
| 2.3 小鼠远端结肠菌群的PCR-DGGE分析 | 第124-125页 |
| 2.3.1 靶标16S rDNA V6-V8区通用引物PCR-DGGE分析 | 第124页 |
| 2.3.2 靶标16S rDNA乳酸杆菌属特异引物PCR-DGGE分析 | 第124页 |
| 2.3.3 靶标16S rDNA拟杆菌属特异引物PCR-DGGE分析 | 第124-125页 |
| 2.3.4 靶标16S rDNA梭菌属Ⅳ簇特异引物PCR-DGGE分析 | 第125页 |
| 3 讨论和小结 | 第125-131页 |
| 3.1 讨论 | 第125-126页 |
| 3.1.1 冠突散囊菌的急性毒性 | 第125-126页 |
| 3.1.2 冠突散囊菌可能具有调节肠道菌群功能 | 第126页 |
| 3.2 小结 | 第126-131页 |
| 第七章 结论 | 第131-134页 |
| 1 主要研究结果 | 第131-132页 |
| 1.1 茯砖茶中真菌菌群结构的解析 | 第131页 |
| 1.2 茯砖茶中分离的功能菌株的鉴定及系统发育分析 | 第131页 |
| 1.3 茯砖茶相关样品中蒽醌类物质组分分析 | 第131-132页 |
| 1.4 茯砖茶水提物对肠出血性大肠杆菌感染小鼠的干预 | 第132页 |
| 1.5 冠突散囊菌菌体对小鼠结肠菌群的影响 | 第132页 |
| 2 特色与创新 | 第132-133页 |
| 3 展望 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-147页 |
| 缩写词 | 第147-149页 |
| 附录 | 第149-157页 |
| 附录A. 琼脂糖电泳的基本方法 | 第149-150页 |
| 附录B. PCR扩增产物克隆转化的基本方法 | 第150-152页 |
| 附录C. 质粒提取和克隆子鉴定的基本方法 | 第152-154页 |
| 附录D. DGGE实验操作的基本方法 | 第154-156页 |
| 附录E. 聚丙烯酰胺凝胶中DNA回收的基本方法 | 第156-157页 |
| 致谢 | 第157-158页 |
| 作者简介 | 第158-159页 |
