摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
缩略语 | 第7-12页 |
第1章 引言 | 第12-22页 |
1.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇研究进展 | 第12-17页 |
1.1.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇理化性质 | 第12-13页 |
1.1.2 脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒理性质研究进展 | 第13-14页 |
1.1.3 DON的污染情况及限量标准 | 第14-15页 |
1.1.4 DON检测方法 | 第15-17页 |
1.2 小分子抗原的合成 | 第17-21页 |
1.2.1 小分子抗原的化学合成 | 第17-20页 |
1.2.2 小分子抗原的生物合成 | 第20-21页 |
1.3 主要研究内容及意义 | 第21-22页 |
1.3.1 主要研究内容 | 第21页 |
1.3.2 研究意义 | 第21-22页 |
第2章 DON多肽模拟表位的淘选及鉴定 | 第22-31页 |
2.1 实验材料 | 第22-24页 |
2.1.1 仪器设备 | 第22-23页 |
2.1.2 生物材料和试剂 | 第23页 |
2.1.3 试剂配制 | 第23-24页 |
2.2 实验方法 | 第24-27页 |
2.2.1 DON模拟表位的亲和淘选 | 第24-25页 |
2.2.2 DON模拟表位的鉴定 | 第25-26页 |
2.2.3 Phage-ELISA标准曲线的建立 | 第26-27页 |
2.3 结果和讨论 | 第27-30页 |
2.3.1 DON模拟表位的亲和淘选 | 第27页 |
2.3.2 阳性克隆的鉴定 | 第27-29页 |
2.3.3 DON模拟表位测序 | 第29页 |
2.3.4 Phage-ELISA标准曲线的建立 | 第29-30页 |
2.4 小结 | 第30-31页 |
第3章 DON全抗原的生物合成及其ELISA的建立 | 第31-47页 |
3.1 实验材料 | 第31-33页 |
3.1.1 仪器设备 | 第31-32页 |
3.1.2 生物材料和试剂 | 第32页 |
3.1.3 主要溶液的配制 | 第32-33页 |
3.2 实验方法 | 第33-38页 |
3.2.1 E.coli DH5α、E.coli TB1感受态细胞的制备 | 第33页 |
3.2.2 D_8-MBP表达载体的构建 | 第33-35页 |
3.2.3 DON全抗原(D_8-MBP)的生物合成 | 第35-36页 |
3.2.4 基于D_8-MBP建立ELISA(D_8-MBP-ELISA) | 第36-37页 |
3.2.5 D_8-MBP免疫学性能的影响因素 | 第37-38页 |
3.2.6 D_8-MBP的特异性分析 | 第38页 |
3.3 结果与讨论 | 第38-46页 |
3.3.1 D_8-MBP表达载体的构建 | 第38-40页 |
3.3.2 D_8-MBP的表达与纯化 | 第40-41页 |
3.3.3 D_8-MBP-ELISA的建立 | 第41-43页 |
3.3.4 D_8-MBP免疫学性能的影响因素 | 第43-45页 |
3.3.4.1 pH值对D_8-MBP的影响 | 第43页 |
3.3.4.2 盐离子浓度对D_8-MBP的影响 | 第43-44页 |
3.3.4.3 热处理对D_8-MBP的影响 | 第44-45页 |
3.3.5 D_8-MBP特异性分析 | 第45-46页 |
3.4 小结 | 第46-47页 |
第4章 基于D_8-MBP及胶体金建立了D_8-MBP-GICA | 第47-56页 |
4.1 实验材料 | 第47-48页 |
4.1.1 仪器设备 | 第47页 |
4.1.2 生物材料和试剂 | 第47-48页 |
4.2 试验方法 | 第48-50页 |
4.2.1 两步法合成海胆状胶体金(Gold nanoflowers,Au NFs) | 第48页 |
4.2.2 胶体金试纸条的组装 | 第48-49页 |
4.2.3 抗体偶联海胆状胶体金条件的优化 | 第49页 |
4.2.4 抗原划线浓度的优化 | 第49页 |
4.2.5 抗体标记浓度的优化 | 第49页 |
4.2.6 D_8-MBP-GICA检测流程 | 第49-50页 |
4.2.7 D_8-MBP-GICA灵敏度的测定 | 第50页 |
4.3 结果与讨论 | 第50-55页 |
4.3.1 胶体金的表征 | 第50-52页 |
4.3.2 抗体偶联海胆状胶体金条件的优化 | 第52-53页 |
4.3.3 抗原划线浓度的优化 | 第53页 |
4.3.4 抗体标记浓度的优化 | 第53-54页 |
4.3.5 灵敏度的测定 | 第54-55页 |
4.4 小结 | 第55-56页 |
第5章 实际样品检测中的应用 | 第56-62页 |
5.1 实验材料 | 第56页 |
5.1.1 仪器设备 | 第56页 |
5.1.2 生物材料和试剂 | 第56页 |
5.2 试验方法 | 第56-57页 |
5.2.1 D_8-MBP-ELISA的实际样品检测 | 第56-57页 |
5.2.2 样品的加标回收 | 第57页 |
5.2.3 D_8-MBP-GICA的实际样品检测 | 第57页 |
5.2.4 ELISA试剂盒验证方法正确性 | 第57页 |
5.3 结果与讨论 | 第57-60页 |
5.3.1 样品的加标回收 | 第57-58页 |
5.3.2 三种方法检测实际样品中DON含量的比较 | 第58-60页 |
5.4 小结 | 第60-62页 |
第6章 结论与展望 | 第62-63页 |
6.1 结论 | 第62页 |
6.2 展望 | 第62-63页 |
致谢 | 第63-64页 |
参考文献 | 第64-69页 |
硕士期间研究成果 | 第69页 |