| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略语 | 第9-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-38页 |
| 1.1 伏马菌素及其研究进展 | 第14-20页 |
| 1.1.1 伏马菌素 | 第14-15页 |
| 1.1.2 伏马菌素毒理性质 | 第15-16页 |
| 1.1.3 伏马菌素污染状况及限量标准 | 第16-17页 |
| 1.1.4 伏马菌素B_1检测方法研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2 绿色免疫分析技术研究进展 | 第20-26页 |
| 1.2.1 绿色免疫分析概述 | 第20页 |
| 1.2.2 小分子半抗原的替代物 | 第20-21页 |
| 1.2.3 抗独特型抗体 | 第21-26页 |
| 1.3 纳米抗体研究进展 | 第26-36页 |
| 1.3.1 纳米抗体的结构 | 第26-27页 |
| 1.3.2 纳米抗体的特性 | 第27-29页 |
| 1.3.3 纳米抗体的制备 | 第29-31页 |
| 1.3.4 纳米抗体的应用 | 第31-34页 |
| 1.3.5 纳米抗体的亲和力成熟 | 第34-36页 |
| 1.4 主要研究内容和意义 | 第36-38页 |
| 1.4.1 主要研究内容 | 第36页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第36-38页 |
| 第2章 抗伏马菌素B_1单抗的独特型纳米抗体的淘选与鉴定 | 第38-63页 |
| 2.1 实验材料 | 第38-40页 |
| 2.1.1 主要材料及试剂 | 第38页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第38-39页 |
| 2.1.3 主要溶剂和培养基 | 第39-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-46页 |
| 2.2.1 FB_1抗独特型纳米抗体的亲和淘选 | 第40-41页 |
| 2.2.2 阳性克隆的鉴定 | 第41-42页 |
| 2.2.3 序列测定与分析 | 第42页 |
| 2.2.4 pET?B26重组表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.2.5 FB_1抗独特型纳米抗体的表达、纯化与鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.6 FB_1抗独特型纳米抗体的活性分析 | 第44-46页 |
| 2.2.7 基于抗独特型纳米抗体建立Nb?ELISA的验证 | 第46页 |
| 2.3 实验结果 | 第46-59页 |
| 2.3.1 FB_1抗独特型纳米抗体的淘选 | 第46-47页 |
| 2.3.2 FB_1抗独特型纳米抗体的鉴定 | 第47-48页 |
| 2.3.3 FB_1抗独特型纳米抗体的序列分析 | 第48-49页 |
| 2.3.4 Phage?ELISA标准曲线的建立 | 第49页 |
| 2.3.5 p ET?B26重组表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 2.3.6 FB_1抗独特型纳米抗体的表达 | 第50-51页 |
| 2.3.7 以FB_1抗独特型纳米抗体为包被抗原建立Nb?ELISA | 第51-52页 |
| 2.3.8 亲和力分析 | 第52-53页 |
| 2.3.9 p H和离子强度对Nb?ELISA的影响 | 第53-56页 |
| 2.3.10 Nb?ELISA的验证分析 | 第56-59页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第59-63页 |
| 2.4.1 讨论 | 第59-61页 |
| 2.4.2 小结 | 第61-63页 |
| 第3章 抗独特型纳米抗体?碱性磷酸酶融合蛋白的原核表达、活性分析及其应用研究 | 第63-82页 |
| 3.1 实验材料 | 第63-64页 |
| 3.1.1 主要材料及试剂 | 第63页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第63-64页 |
| 3.1.3 主要溶剂和培养基 | 第64页 |
| 3.2 方法与步骤 | 第64-68页 |
| 3.2.1 表达载体pecan?VHH?AP的构建 | 第64-66页 |
| 3.2.2 Ab2 Nb?AP的表达、纯化及鉴定 | 第66页 |
| 3.2.3 Ab2 Nb?AP的活性分析 | 第66-67页 |
| 3.2.4 基于Ab2 Nb?AP一步免疫分析方法的建立 | 第67页 |
| 3.2.5 一步CLIA反应体系的优化 | 第67页 |
| 3.2.6 基于Ab2 Nb?AP一步免疫分析方法的可靠性 | 第67-68页 |
| 3.3 实验结果 | 第68-79页 |
| 3.3.1 原核表达载体pecan?VHH?AP的构建 | 第68-69页 |
| 3.3.2 Ab2 Nb?AP的诱导表达、纯化及鉴定 | 第69-70页 |
| 3.3.3 Ab2 Nb?AP活性的分析 | 第70-72页 |
| 3.3.4 基于Ab2 Nb?AP一步免疫分析方法的建立 | 第72-73页 |
| 3.3.5 一步CLIA反应条件的优化 | 第73-75页 |
| 3.3.6 一步CLIA特异性 | 第75-76页 |
| 3.3.7 实际样品的检测 | 第76-79页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第79-82页 |
| 3.4.1 讨论 | 第79-81页 |
| 3.4.2 小结 | 第81-82页 |
| 第4章 抗独特型纳米抗体B26的亲和力成熟 | 第82-106页 |
| 4.1 实验材料 | 第83-84页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第83页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第83页 |
| 4.1.3 主要溶液和培养基 | 第83-84页 |
| 4.2 实验方法 | 第84-91页 |
| 4.2.1 B26的同源建模 | 第84-85页 |
| 4.2.2 热点随机突变文库的构建 | 第85-88页 |
| 4.2.3 突变纳米抗体噬菌体初始文库的救援、扩增及纯化 | 第88页 |
| 4.2.4 噬菌体展示纳米抗体文库的淘选与鉴定 | 第88-89页 |
| 4.2.5 突变库中阳性克隆的鉴定 | 第89-90页 |
| 4.2.6 突变抗独特型纳米抗体的表达与纯化 | 第90-91页 |
| 4.2.7 突变纳米抗体活性的分析 | 第91页 |
| 4.3 实验结果 | 第91-102页 |
| 4.3.1 B26的同源建模分析 | 第91-92页 |
| 4.3.2 突变纳米抗体文库的构建及鉴定 | 第92-94页 |
| 4.3.3 突变抗独特型纳米抗体的淘选 | 第94-95页 |
| 4.3.4 突变抗独特型纳米抗体的鉴定 | 第95-96页 |
| 4.3.5 突变抗独特型纳米抗体的序列分析 | 第96页 |
| 4.3.6 突变抗独特型纳米抗体与抗体亲和力分析 | 第96-98页 |
| 4.3.7 抗独特型纳米抗体的热稳定性 | 第98页 |
| 4.3.8 以抗独特型纳米抗体B_1D为替代标准物建立ELISA | 第98-100页 |
| 4.3.9 以Ab2 Nb B_1D为标准物的间接竞争ELISA的验证 | 第100-101页 |
| 4.3.10 实际样品的检测 | 第101-102页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第102-106页 |
| 4.4.1 讨论 | 第102-104页 |
| 4.4.2 小结 | 第104-106页 |
| 第5章 结论与展望 | 第106-109页 |
| 5.1 结论 | 第106-108页 |
| 5.2 展望 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 附录A 氨基酸基本信息表 | 第123-124页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第124-125页 |
| 个人简介 | 第125页 |
