| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语索引 | 第7-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-22页 |
| 1.1 食源性致病菌 | 第14页 |
| 1.1.1 食品安全与食源性致病菌 | 第14页 |
| 1.1.2 食源性致病菌的危害 | 第14页 |
| 1.2 食源性致病菌的检测方法 | 第14-17页 |
| 1.2.1 传统检测方法 | 第14-15页 |
| 1.2.2 免疫学检测方法 | 第15页 |
| 1.2.3 分子生物学检测方法 | 第15-17页 |
| 1.2.4 传感器检测方法 | 第17页 |
| 1.3 核酸适配子研究概况 | 第17-20页 |
| 1.3.1 核酸适配子 | 第17-18页 |
| 1.3.2 核酸适配体的特点 | 第18页 |
| 1.3.3 核酸适配子与抗体性能的比较 | 第18页 |
| 1.3.4 核酸适配子的筛选技术 | 第18-19页 |
| 1.3.5 核酸适配子在食源性致病菌检测中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 大肠杆菌O157:H7活菌的IMS-PMA-IAC-PCR检测体系的建立 | 第22-34页 |
| 2.1 前言 | 第22-23页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第23-26页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第23-25页 |
| 2.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第25页 |
| 2.2.3 实验相关试剂和培养基的配制 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-29页 |
| 2.3.1 细菌的培养和计数 | 第26页 |
| 2.3.2 细菌DNA的提取 | 第26页 |
| 2.3.3 免疫磁分离捕获效率的测定 | 第26页 |
| 2.3.4 PMA对细菌的处理 | 第26页 |
| 2.3.5 PCR反应 | 第26-27页 |
| 2.3.6 PCR产物的验证 | 第27页 |
| 2.3.7 PMA抑制死菌DNA的PCR扩增能力的评价 | 第27-28页 |
| 2.3.8 纯培养物中PCR方法检测限的确定 | 第28页 |
| 2.3.9 引物特异性的验证 | 第28页 |
| 2.3.10 纯培养物中IMS-PMA-IAC-PCR方法检测限的确定 | 第28页 |
| 2.3.11 人工污染牛奶中IMS-PMA-IAC-PCR方法检测限的确定 | 第28-29页 |
| 2.4 实验结果 | 第29-32页 |
| 2.4.1 PCR反应条件的优化 | 第29-30页 |
| 2.4.2 免疫磁分离对大肠杆菌O157:H7捕获效率的确定 | 第30页 |
| 2.4.3 PMA抑制死菌DNA扩增能力的确定 | 第30-31页 |
| 2.4.4 引物特异性的验证 | 第31页 |
| 2.4.5 纯培养物中IMS-PMA-IAC-PCR方法的灵敏度 | 第31-32页 |
| 2.4.6 人工污染牛奶中IMS-PMA-IAC-PCR方法的灵敏度 | 第32页 |
| 2.5 讨论与分析 | 第32-34页 |
| 第三章 大肠杆菌O157:H7活菌的IMS-SD-PMA-qPCR检测体系的建立 | 第34-45页 |
| 3.1 前言 | 第34-35页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第35-37页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第35-36页 |
| 3.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第36-37页 |
| 3.2.3 实验相关试剂和培养基的配制 | 第37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-40页 |
| 3.3.1 细菌的培养和计数 | 第37页 |
| 3.3.2 细菌DNA的提取 | 第37页 |
| 3.3.3 PMA对细菌的处理 | 第37页 |
| 3.3.4 引物特异性的验证 | 第37-38页 |
| 3.3.5 SD的浓度和时间的优化 | 第38页 |
| 3.3.6 方法学的比较 | 第38-39页 |
| 3.3.7 人工污染牛奶的检测 | 第39-40页 |
| 3.3.8 人工污染牛奶样品中方法特异性验证 | 第40页 |
| 3.4 实验结果 | 第40-44页 |
| 3.4.1 引物特异性的验证 | 第40页 |
| 3.4.2 SD浓度和时间的确定 | 第40-41页 |
| 3.4.3 qPCR标准曲线的建立 | 第41-42页 |
| 3.4.4 qPCR、PMA-qPCR、SD-PMA-qPCR和传统平板计数法比较 | 第42-43页 |
| 3.4.5 人工污染牛奶中大肠杆菌O157:H7活菌的检测 | 第43-44页 |
| 3.5 讨论与分析 | 第44-45页 |
| 第四章 沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌活菌的SD-PMA-IAC-mPCR检测体系的建立 | 第45-55页 |
| 4.1 前言 | 第45-46页 |
| 4.2 材料与方法 | 第46-47页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第46-47页 |
| 4.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第47页 |
| 4.2.3 实验相关试剂和培养基的配制 | 第47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-50页 |
| 4.3.1 细菌的培养和计数 | 第47页 |
| 4.3.2 细菌DNA的提取 | 第47页 |
| 4.3.3 SD和PMA处理 | 第47页 |
| 4.3.4 mPCR反应体系的优化 | 第47-48页 |
| 4.3.5 mPCR反应条件 | 第48-49页 |
| 4.3.6 引物特异性的验证 | 第49页 |
| 4.3.7 SD和PMA联用对细菌PCR扩增的影响 | 第49页 |
| 4.3.8 纯培养物中检测限的确定 | 第49页 |
| 4.3.9 人工污染食品中鼠伤寒沙门氏菌、宋内氏志贺氏菌和金黄色葡萄球菌活菌的检测 | 第49-50页 |
| 4.4 实验结果 | 第50-54页 |
| 4.4.1 mPCR退火温度和引物浓度的确定 | 第50-51页 |
| 4.4.2 引物特异性的确定 | 第51页 |
| 4.4.3 SD和PMA抑制死菌或者受伤细菌PCR扩增 | 第51-52页 |
| 4.4.4 纯培养物中SD-PMA-IAC-mPCR方法灵敏度 | 第52-53页 |
| 4.4.5 人工污染食品中检测限的确定 | 第53-54页 |
| 4.5 分析与讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 基于QCM传感器筛选鼠伤寒沙门氏菌核酸适配子方法的建立 | 第55-74页 |
| 5.1 前言 | 第55-56页 |
| 5.2 材料与仪器 | 第56-57页 |
| 5.2.1 实验菌株 | 第56页 |
| 5.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第56页 |
| 5.2.3 试剂和培养基的配制 | 第56页 |
| 5.2.4 随机ssDNA文库和相关引物的合成 | 第56-57页 |
| 5.3 实验方法 | 第57-64页 |
| 5.3.1 菌株生长曲线的制备 | 第57页 |
| 5.3.2 菌株的处理 | 第57页 |
| 5.3.3 鼠伤寒沙门氏菌核酸适配子的筛选 | 第57-58页 |
| 5.3.4 PCR扩增 | 第58-59页 |
| 5.3.5 PCR产物的纯化 | 第59页 |
| 5.3.6 ssDNA的制备 | 第59页 |
| 5.3.7 克隆和测序 | 第59-61页 |
| 5.3.8 候选核酸适配子亲和力的测定 | 第61-62页 |
| 5.3.9 K_d和特异性的测定 | 第62-63页 |
| 5.3.10 基于核酸适配子的QCM方法检测鼠伤寒沙门氏菌 | 第63-64页 |
| 5.4 实验结果 | 第64-72页 |
| 5.4.1 鼠伤寒沙门氏菌生长曲线的测定 | 第64页 |
| 5.4.2 鼠伤寒沙门氏菌核酸适配子的筛选过程 | 第64-67页 |
| 5.4.3 鼠伤寒沙门氏菌适配子克隆子的PCR鉴定结果 | 第67页 |
| 5.4.4 核酸适配子测序结果及分析 | 第67-70页 |
| 5.4.5 亲和力的比较 | 第70页 |
| 5.4.6 核酸适配子K_d | 第70-71页 |
| 5.4.7 特异性 | 第71页 |
| 5.4.8 基于核酸适配子QCM方法检测鼠伤寒沙门氏菌 | 第71-72页 |
| 5.5 讨论与分析 | 第72-74页 |
| 第六章 基于免疫磁分离和核酸适配子PCR技术检测鼠伤寒沙门氏菌方法的建立 | 第74-83页 |
| 6.1 前言 | 第74-75页 |
| 6.2 材料与仪器 | 第75页 |
| 6.2.1 实验菌株 | 第75页 |
| 6.2.2 主要试剂和仪器设备 | 第75页 |
| 6.2.3 主要溶液和培养基的配制 | 第75页 |
| 6.2.4 核酸适配子和相关序列的合成 | 第75页 |
| 6.3 实验方法 | 第75-78页 |
| 6.3.1 细菌的培养和计数 | 第75-76页 |
| 6.3.2 磁珠用量对磁珠捕获效率的影响 | 第76页 |
| 6.3.3 抗体用量对磁珠捕获效率的影响 | 第76页 |
| 6.3.4 免疫磁分离和核酸适配子PCR技术检测鼠伤寒沙门氏菌方法的建立 | 第76-77页 |
| 6.3.5 洗脱液pH值的优化 | 第77页 |
| 6.3.6 灵敏度的确定 | 第77页 |
| 6.3.7 特异性的确定 | 第77-78页 |
| 6.3.8 火鸡馅中鼠伤寒沙门氏菌的检测 | 第78页 |
| 6.4 实验结果 | 第78-81页 |
| 6.4.1 免疫磁分离中磁珠量和抗体量的确定 | 第78-79页 |
| 6.4.2 洗脱液pH值的确定 | 第79页 |
| 6.4.3 方法检测限 | 第79-80页 |
| 6.4.4 方法特异性 | 第80-81页 |
| 6.4.5 人工污染火鸡馅中方法检测限的确定 | 第81页 |
| 6.5 分析与讨论 | 第81-83页 |
| 第七章 结论与展望 | 第83-85页 |
| 7.1 结论 | 第83-84页 |
| 7.2 展望 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 附录A 试剂 | 第86-88页 |
| 附录B 实验仪器设备 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-96页 |
| 个人介绍 | 第96页 |
| 攻读学位期间研究成果 | 第96-97页 |
