| 文献综述 | 第1-29页 |
| 1 耐热菌在苹果浓缩汁中的危害及其检测 | 第10-14页 |
| ·苹果加工业中的耐热菌问题 | 第10-12页 |
| ·耐热菌的发现 | 第10页 |
| ·耐热菌的危害 | 第10-11页 |
| ·耐热菌的特性及控制 | 第11-12页 |
| ·耐热菌检测现状 | 第12-14页 |
| ·常规检测 | 第12页 |
| ·快速检测方法 | 第12-14页 |
| 2 PCR技术在食品工业中的应用概述 | 第14-26页 |
| ·PCR概述 | 第14-17页 |
| ·PCR基本原理 | 第14-15页 |
| ·PCR反应体系 | 第15-16页 |
| ·PCR循环参数 | 第16-17页 |
| ·PCR在食品工业中的应用及用PCR检测食品微生物概述 | 第17-18页 |
| ·利用PCR技术检验食品中的转基因成分 | 第17页 |
| ·利用PCR技术鉴定食品原料种类 | 第17页 |
| ·利用PCR技术进行食品微生物检验 | 第17-18页 |
| ·PCR检测法的不足 | 第18-19页 |
| ·假阳性问题 | 第18页 |
| ·无法区分微生物的死、活 | 第18页 |
| ·假阴性问题 | 第18页 |
| ·难于定量 | 第18-19页 |
| ·提高PCR检测灵敏度的方法 | 第19-25页 |
| ·优化引物设计 | 第19页 |
| ·改善模板制备方法 | 第19-21页 |
| ·浓缩集菌 | 第19-20页 |
| ·选择恰当的核酸提取方法 | 第20-21页 |
| ·检测方法 | 第21-22页 |
| ·凝胶检测系统 | 第21页 |
| ·HPLC检测系统 | 第21页 |
| ·固相测定系统 | 第21页 |
| ·其他的检测方法 | 第21-22页 |
| ·其它 | 第22-25页 |
| ·巢式PCR | 第22页 |
| ·热启动PCR | 第22-23页 |
| ·降落PCR | 第23-24页 |
| ·增敏PCR | 第24页 |
| ·增效剂 | 第24-25页 |
| ·PCR的污染及质量控制 | 第25-26页 |
| ·PCR污染 | 第25页 |
| ·PCR质量控制 | 第25-26页 |
| 3 定量PCR | 第26-29页 |
| ·定量PCR的原理 | 第26-27页 |
| ·定量PCR的方法学进展 | 第27-29页 |
| ·对PCR产物的直接定量 | 第27页 |
| ·极限稀释法 | 第27页 |
| ·非竞争性对照基因定量法 | 第27页 |
| ·竞争定量PCR | 第27-28页 |
| ·荧光定量PCR | 第28-29页 |
| 正文 | 第29-62页 |
| 1 引言 | 第29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-38页 |
| ·试验材料 | 第29-30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·试验设计与方法 | 第31-38页 |
| ·模板制备与定性系统优化 | 第31-35页 |
| ·煮沸裂解法 | 第31-32页 |
| ·酶裂解煮沸法 | 第32-33页 |
| ·超声波法 | 第33页 |
| ·微波法 | 第33页 |
| ·经典有机溶剂抽提法 | 第33-34页 |
| ·各提取方法比较 | 第34页 |
| ·体系优化 | 第34-35页 |
| ·竞争模板构建 | 第35-37页 |
| ·设计引物 | 第35-36页 |
| ·温度梯度PCR | 第36页 |
| ·竞争模板的获得与验证 | 第36-37页 |
| ·竞争模板、目标模板的制备 | 第37页 |
| ·共扩增检测低限的确立 | 第37页 |
| ·共扩增效率比较 | 第37页 |
| ·竞争定量PCR检测体系的建立 | 第37-38页 |
| ·检测培养样品 | 第37页 |
| ·检测人工回添样品 | 第37-38页 |
| ·检测果汁 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-54页 |
| ·模板制备与定性系统优化 | 第38-50页 |
| ·煮沸裂解法 | 第38-40页 |
| ·煮沸时间对DNA得率的影响 | 第38-39页 |
| ·添加不同浓度裂解液对PCR结果影响 | 第39页 |
| ·煮沸法各裂解液直接电泳及PCR效果比较 | 第39-40页 |
| ·酶裂解煮沸法 | 第40-43页 |
| ·酶处理用量对DNA得率影响 | 第40-41页 |
| ·酶法直接电泳及PCR | 第41-43页 |
| ·微波法 | 第43-44页 |
| ·超声法 | 第44-45页 |
| ·超声条件 | 第44页 |
| ·超声法直接电泳及PCR | 第44-45页 |
| ·经典法及各改进法 | 第45-46页 |
| ·各提取方法比较 | 第46-47页 |
| ·体系优化 | 第47-50页 |
| ·热启动降落PCR | 第47-48页 |
| ·添加剂 | 第48页 |
| ·25μL PCR体系优化 | 第48-49页 |
| ·优化体系的检测极限 | 第49-50页 |
| ·竞争模板构建 | 第50-52页 |
| ·温度梯度PCR | 第50页 |
| ·竞争模板的获得与验证 | 第50-51页 |
| ·共扩增检测低限的确立 | 第51-52页 |
| ·竞争定量PCR检测体系的建立 | 第52-54页 |
| ·检测培养样品 | 第52-53页 |
| ·检测人工回添样品 | 第53页 |
| ·检测果汁 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-60页 |
| ·关于提高检测灵敏度与PCR反应体系优化 | 第54-57页 |
| ·最佳模板制备方法探讨 | 第54-56页 |
| ·引物设计与PCR方法改进提高体系灵敏度的探讨 | 第56-57页 |
| ·关于竞争模板的构建 | 第57-59页 |
| ·竞争定量PCR法检测耐热菌的讨论 | 第59-60页 |
| 5 总结 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 攻读学位期间研究成果 | 第72页 |