| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 果糖基转移酶的研究现状 | 第12-15页 |
| 1.1.1 果糖基转移酶的来源 | 第12-13页 |
| 1.1.2 果糖基转移酶的生产方法 | 第13-14页 |
| 1.1.3 果糖基转移酶的分离纯化及性质 | 第14-15页 |
| 1.1.4 果糖基转移酶的催化反应机理 | 第15页 |
| 1.2 三氯蔗糖的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.0 功能性甜味剂 | 第15-16页 |
| 1.2.1 功能性甜味剂三氯蔗糖 | 第16页 |
| 1.2.2 三氯蔗糖的应用 | 第16-17页 |
| 1.2.3 三氯蔗糖的关键中间体合成方法 | 第17-18页 |
| 1.3 酶在离子液体的催化研究 | 第18-22页 |
| 1.3.1 离子液体概述 | 第18页 |
| 1.3.2 离子液体的种类和性质 | 第18-19页 |
| 1.3.3 离子液体中糖苷酶催化反应 | 第19-20页 |
| 1.3.4 离子液体对酶活性的影响 | 第20-21页 |
| 1.3.5 离子液体中酶的稳定性 | 第21页 |
| 1.3.6 以离子液体为反应介质制备蔗糖6乙酸酯 | 第21-22页 |
| 1.4 本课题的立题意义及研究内容 | 第22-24页 |
| 1.4.1 立题依据及意义 | 第22页 |
| 1.4.2 本课题研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 米曲霉果糖基转移酶纯化和活性分析 | 第24-40页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌种 | 第24页 |
| 2.1.2 试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 仪器 | 第25页 |
| 2.1.4 培养基 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-29页 |
| 2.2.1 米曲霉的发酵培养 | 第26页 |
| 2.2.2 果糖基转移酶的分离纯化过程 | 第26-28页 |
| 2.2.3 SDS-PAGE电泳检测 | 第28页 |
| 2.2.4 蛋白浓度的测定—紫外光吸收法 | 第28-29页 |
| 2.2.5 米曲霉果糖基转移酶的多肽指纹谱图 | 第29页 |
| 2.3 米曲霉果糖基转移酶活性测定 | 第29-31页 |
| 2.3.1 水系酶催化反应体系 | 第29页 |
| 2.3.2 果糖苷酶转移活性的定性测定 | 第29-31页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第31-34页 |
| 2.4.1 硫酸铵沉淀 | 第31页 |
| 2.4.2 Q-Sepharose Fast Flow离子交换层析分离纯化 | 第31-32页 |
| 2.4.3 Sephacryl S-200 HR凝胶过滤 | 第32-33页 |
| 2.4.4 纯化的蛋白电泳 | 第33页 |
| 2.4.5 粗酶液纯化结果 | 第33-34页 |
| 2.5 果糖基转移酶AoFT肽指纹图谱分析 | 第34-35页 |
| 2.6 果糖苷酶转移活性的定性分析结果 | 第35-38页 |
| 2.6.1 HPLC定性分析 | 第35-37页 |
| 2.6.2 LC-MS定性分析 | 第37-38页 |
| 2.7 小结 | 第38-40页 |
| 第三章 米曲霉果糖基转移酶的酶学性质 | 第40-50页 |
| 3.1 实验材料 | 第40页 |
| 3.1.1 蛋白 | 第40页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第40页 |
| 3.1.3 主要药品与试剂 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 水系酶催化反应体系 | 第40-41页 |
| 3.2.2 蔗糖6乙酸酯标准曲线的绘制 | 第41页 |
| 3.2.3 LC-MS法的检测条件 | 第41页 |
| 3.2.4 温度对果糖基转移酶AoFT的影响 | 第41页 |
| 3.2.5 pH对果糖基转移酶AoFT的影响 | 第41页 |
| 3.2.6 果糖基转移酶AoFT的pH稳定性研究 | 第41页 |
| 3.2.7 反应时间对果糖基转移酶AoFT的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.8 有机溶剂对果糖基转移酶AoFT的影响 | 第42页 |
| 3.2.9 金属离子、EDTA和表面活性剂对果糖基转移酶AoFT的影响 | 第42页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第42-49页 |
| 3.3.1 米曲霉果糖基转移酶定量检测 | 第42-43页 |
| 3.3.2 温度对果糖基转移酶AoFT活性的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.3 酶的热稳定性研究 | 第44页 |
| 3.3.4 pH对酶活性的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.6 酶的pH稳定性 | 第45-46页 |
| 3.3.7 反应时间对酶活性的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.8 有机溶剂对酶活力的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.9 金属离子和表面活性剂对酶活性的影响 | 第48-49页 |
| 3.4 小结 | 第49-50页 |
| 第四章 离子液体对米曲霉果糖基转移酶的活性催化 | 第50-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 4.1.1 蛋白 | 第50页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第50页 |
| 4.1.3 主要药品与试剂 | 第50-51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 4.2.1 离子液体中酶催化反应体系 | 第51页 |
| 4.2.2 酶活定义 | 第51页 |
| 4.2.3 样品处理方法 | 第51页 |
| 4.2.4 LC-MS检测条件 | 第51页 |
| 4.2.5 不同的离子液体对酶活性的影响 | 第51-52页 |
| 4.2.7 傅里叶变换红外光谱（FT-IR）对酶构象的测定 | 第52-53页 |
| 4.2.8 圆二色谱（CD）对酶构象的测定 | 第53-54页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第54-57页 |
| 4.3.1 离子液体对酶的催化活性的影响 | 第54页 |
| 4.3.2 傅里叶变换红外光谱（FT-IR）对酶构象的测定 | 第54-56页 |
| 4.3.3 圆二色谱（CD）测定蛋白质的二级结构的变化 | 第56-57页 |
| 4.4 小结 | 第57-58页 |
| 第五部分 结论与展望 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58-59页 |
| 5.2 展望 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录1 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第69-70页 |
| 附录2 蛋白纯化所用部分溶液 | 第70页 |
