| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 引言 | 第7-15页 |
| 1.1 脂多糖概述 | 第7-10页 |
| 1.1.1 脂多糖的合成及功能简介 | 第7页 |
| 1.1.2 核心糖的结构及功能 | 第7-9页 |
| 1.1.3 大肠杆菌核心糖的合成 | 第9-10页 |
| 1.2 胞外多糖及克拉酸概述 | 第10-12页 |
| 1.2.1 胞外多糖简介 | 第10-11页 |
| 1.2.2 胞外多糖克拉酸的结构和合成 | 第11页 |
| 1.2.3 克拉酸的功能研究 | 第11-12页 |
| 1.2.4 脂多糖与克拉酸的相互联系 | 第12页 |
| 1.3 Rcs系统的调控机制研究 | 第12-13页 |
| 1.4 立题背景及意义 | 第13-14页 |
| 1.5 课题研究方案和研究目标 | 第14-15页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第15-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-18页 |
| 2.1.1 菌株、质粒及引物 | 第15-17页 |
| 2.1.2 培养基及培养条件 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器设备及试剂 | 第17-18页 |
| 2.2 分子生物学相关操作 | 第18-20页 |
| 2.2.1 质粒及基因组的提取 | 第18页 |
| 2.2.2 PCR体系及反应条件 | 第18页 |
| 2.2.3 酶切和连接反应体系 | 第18-19页 |
| 2.2.4 大肠杆菌细胞中的基因敲除 | 第19页 |
| 2.2.5 大肠杆菌中相关基因的表达 | 第19-20页 |
| 2.2.6 RT-PCR检测基因转录水平的差异 | 第20页 |
| 2.3 克拉酸的提取、纯化和鉴定 | 第20-22页 |
| 2.3.1 克拉酸的提取与纯化 | 第20-21页 |
| 2.3.2 气相色谱法分析 | 第21页 |
| 2.3.3 液相色谱法分析 | 第21页 |
| 2.3.4 傅里叶红外光谱分析 | 第21-22页 |
| 2.3.5 克拉酸的光学显微镜和透射电镜观察 | 第22页 |
| 2.3.6 液体培养基中克拉酸的定量 | 第22页 |
| 2.4 大肠杆菌及突变株的生长特性实验 | 第22-24页 |
| 2.4.1 生长曲线测定及高渗生长能力实验 | 第22-23页 |
| 2.4.2 自凝集实验 | 第23页 |
| 2.4.3 细胞表面的疏水性实验 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-38页 |
| 3.1 大肠杆菌脂多糖结构改变对胞外多糖合成的影响 | 第24-27页 |
| 3.1.1 脂多糖结构改变导致粘液化表型 | 第24页 |
| 3.1.2 胞外多糖媒染观察方法的构建 | 第24-25页 |
| 3.1.3 核心糖突变株在固体培养基中胞外多糖的合成能力 | 第25-26页 |
| 3.1.4 核心糖突变株在液体培养基中胞外多糖的合成能力 | 第26-27页 |
| 3.2 大肠杆菌ΔwaaF突变株的表型变化 | 第27-29页 |
| 3.2.1 脂多糖结构改变导致胞外多糖分泌 | 第27-28页 |
| 3.2.2 对于胞外多糖分泌的透射电镜分析 | 第28页 |
| 3.2.3 ΔwaaF突变株脂多糖结构变化对胞外多糖的影响 | 第28-29页 |
| 3.3 ΔwaaF突变株胞外多糖的色谱分析及敲除鉴定 | 第29-32页 |
| 3.3.1 胞外多糖的气相色谱和红外光谱分析 | 第29-30页 |
| 3.3.2 胞外多糖的液相色谱分析 | 第30-31页 |
| 3.3.3 ΔwaaF突变株中克拉酸的敲除鉴定 | 第31-32页 |
| 3.4 ΔwaaF突变株中克拉酸合成调控通路的探索 | 第32-36页 |
| 3.4.1 ΔwaaF突变株中克拉酸的分泌与Rcs系统磷酸化传递的关系 | 第32-33页 |
| 3.4.2 ΔwaaF突变株中Rcs系统基因突变株的构建 | 第33-34页 |
| 3.4.3 Rcs系统基因突变株中克拉酸的合成情况 | 第34页 |
| 3.4.4 ΔwaaFΔrcsA, ΔwaaFΔrcsF突变株中克拉酸的产生情况 | 第34-35页 |
| 3.4.5 ΔwaaF突变株中克拉酸分泌调控通路的讨论 | 第35-36页 |
| 3.5 基于膜壁结构的克拉酸功能探索 | 第36-38页 |
| 3.5.1 抗高渗能力的变化 | 第36-37页 |
| 3.5.2 自凝集性和疏水性的变化 | 第37-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-40页 |
| 主要结论 | 第38-39页 |
| 展望 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第45页 |
