| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略语表 | 第8-17页 |
| 第1章 绪论 | 第17-30页 |
| 1.1 癌症治疗现状 | 第17-18页 |
| 1.2 人参 | 第18-21页 |
| 1.2.1 人参的主要活性成分 | 第18页 |
| 1.2.2 人参皂苷的分类 | 第18-21页 |
| 1.3 人参皂苷抗肿瘤活性 | 第21-23页 |
| 1.3.1 抑制肿瘤细胞生长 | 第21-22页 |
| 1.3.2 诱导肿瘤细胞凋亡作用 | 第22页 |
| 1.3.3 免疫调节作用 | 第22页 |
| 1.3.4 抑制肿瘤转移作用 | 第22-23页 |
| 1.3.5 抗肿瘤血管生成作用 | 第23页 |
| 1.4 人参皂苷的体内吸收代谢 | 第23-24页 |
| 1.5 人参皂苷的结构修饰 | 第24-25页 |
| 1.6 诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制 | 第25-27页 |
| 1.6.1 外源性的死亡受体途径 | 第26-27页 |
| 1.6.2 内源性的线粒体途径 | 第27页 |
| 1.7 “溶酶体-线粒体”轴心理论 | 第27-28页 |
| 1.8 本文研究的目的意义和主要内容 | 第28-30页 |
| 1.8.1 目的意义 | 第28-29页 |
| 1.8.2 主要研究内容 | 第29-30页 |
| 第2章 人参皂苷Rh2辛酸酯的合成 | 第30-40页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第30-31页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第30页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-32页 |
| 2.3.1 Rh2辛酸酯的合成 | 第31页 |
| 2.3.2 合成产物的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.4 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.4.1 LC/MS鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4.2 ~1H-NMR和~(13)C-NMR鉴定 | 第33-38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-39页 |
| 2.6 本章小结 | 第39-40页 |
| 第3章 Rh2和Rh2-O在Caco2细胞中的吸收机制研究 | 第40-51页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第40-41页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-44页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第41-42页 |
| 3.3.2 MTT检测法检测细胞活力 | 第42页 |
| 3.3.3 Caco 2单层细胞的跨膜转运实验 | 第42-43页 |
| 3.3.4 HepG2细胞的摄入实验 | 第43页 |
| 3.3.5 Rh2和Rh2-O在HepG2细胞中的含量 | 第43-44页 |
| 3.3.6 统计方法 | 第44页 |
| 3.4 结果与分析 | 第44-49页 |
| 3.4.1 Rh2和Rh2-O对Caco 2细胞的毒性作用 | 第44-45页 |
| 3.4.2 酯化作用提高Rh2在Caco 2细胞中的跨膜转运 | 第45-47页 |
| 3.4.3 不同化合物对Rh2和Rh2-O的转运的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.4 HepG2细胞对Rh2和Rh2-O的摄入率 | 第48页 |
| 3.4.5 Rh2-O在HepG2细胞培养过程中的稳定性 | 第48-49页 |
| 3.5 讨论 | 第49-50页 |
| 3.5.1 Rh2在人类肠道中吸收的吸收效果 | 第49页 |
| 3.5.2 Rh2和Rh2-O的吸收途径 | 第49-50页 |
| 3.6 本章小结 | 第50-51页 |
| 第4章 人参皂苷Rh2及其辛酸酯的体外抗肿瘤活性 | 第51-62页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第51-53页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.2.2 有关溶液配制 | 第52-53页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-55页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第53-54页 |
| 4.3.2 MTT检测法检测细胞活力 | 第54页 |
| 4.3.3 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第54页 |
| 4.3.4 DAPI染色观察细胞核形态 | 第54-55页 |
| 4.3.5 统计方法 | 第55页 |
| 4.4 结果与分析 | 第55-60页 |
| 4.4.1 人参皂苷Rh2和Rh2-O对HepG2和HL-02细胞的毒性作用 | 第55-57页 |
| 4.4.2 人参皂苷Rh2和Rh2-O诱导HepG2细胞凋亡 | 第57-59页 |
| 4.4.3 人参皂苷Rh2和Rh2-O对HepG2细胞核形态的影响 | 第59-60页 |
| 4.5 讨论 | 第60页 |
| 4.5.1 Rh2和Rh2-O对HepG2的细胞毒性 | 第60页 |
| 4.5.2 Rh2和Rh2-O诱导HepG2细胞凋亡 | 第60页 |
| 4.6 本章小结 | 第60-62页 |
| 第5章 Akt/p38 MAPK参与Rh2-O诱导HepG2细胞G1细胞周期阻滞 | 第62-84页 |
| 5.1 引言 | 第62页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第62-64页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 5.2.2 有关溶液的配制 | 第63-64页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第64页 |
| 5.3 实验方法 | 第64-69页 |
| 5.3.1 细胞培养和处理 | 第64页 |
| 5.3.2 PI染色流式细胞术检测细胞周期分布 | 第64-65页 |
| 5.3.3 RNA提取及实时定量PCR | 第65-66页 |
| 5.3.4 Western blot分析蛋白表达水平 | 第66-68页 |
| 5.3.5 MTT法检测细胞活力 | 第68-69页 |
| 5.3.6 统计方法 | 第69页 |
| 5.4 结果与分析 | 第69-81页 |
| 5.4.1 Rh2-O诱发HepG2细胞周期阻滞 | 第69-71页 |
| 5.4.2 Rh2-O下调周期蛋白cyclin D3,cyclin E,CDK4 and CDK6的表达 | 第71-75页 |
| 5.4.3 Rh2-O处理诱导Akt失活 | 第75-76页 |
| 5.4.4 Rh2-O处理对MAPKs磷酸化水平的影响 | 第76-78页 |
| 5.4.5 Rh2-O介导的Akt蛋白失活在HepG2细胞G1周期阻滞中发挥重要功能 | 第78-79页 |
| 5.4.6 p38 MAPK磷酸化参与Rh2-O诱发的HepG2细胞G1周期阻滞 | 第79-81页 |
| 5.5 讨论 | 第81-83页 |
| 5.5.1 Rh2和Rh2-O诱导HepG2细胞发生G1周期阻滞 | 第81-82页 |
| 5.5.2 Akt失活参与Rh2-O诱发HepG2细胞G1周期阻滞 | 第82-83页 |
| 5.5.3 p38 MAPK磷酸化抑制Rh2-O诱发的HepG2细胞G1周期阻滞 | 第83页 |
| 5.6 本章小结 | 第83-84页 |
| 第6章 死亡受体通路和溶酶体-线粒体轴通路参与人参皂苷Rh2和Rh2-O诱导HepG2细胞凋亡 | 第84-109页 |
| 6.1 引言 | 第84-85页 |
| 6.2 实验材料与仪器 | 第85-86页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第85页 |
| 6.2.2 有关溶液配制 | 第85页 |
| 6.2.3 实验仪器 | 第85-86页 |
| 6.3 实验方法 | 第86-88页 |
| 6.3.1 DCFH-DA染色检测细胞内活性氧水平 | 第86页 |
| 6.3.2 MTT法检测细胞活力 | 第86页 |
| 6.3.3 Acridine Orange(AO)染色检测溶酶体膜稳定性 | 第86-87页 |
| 6.3.4 JC-1染色检测线粒体膜电位 | 第87页 |
| 6.3.5 RNA提取及实时定量PCR | 第87页 |
| 6.3.6 Western blot分析蛋白表达水平 | 第87-88页 |
| 6.3.7 数据处理 | 第88页 |
| 6.4 结果与分析 | 第88-106页 |
| 6.4.1 Rh2-O对细胞死亡受体表达的影响 | 第88页 |
| 6.4.2 Rh2-O对caspase8活化水平的影响 | 第88-91页 |
| 6.4.3 Rh2-O诱导HepG2细胞产生活性氧 | 第91-93页 |
| 6.4.4 Rh2-O对HepG2细胞溶酶体膜稳定性的影响 | 第93-94页 |
| 6.4.5 Rh2-O对组织蛋白酶释放的影响 | 第94-96页 |
| 6.4.6 Cat D和Cat B的抑制剂对细胞存活率的影响 | 第96-97页 |
| 6.4.7 抗氧化剂NAC对Cat D释放的影响 | 第97-98页 |
| 6.4.8 Rh2和Rh2-O对Bcl-2家族蛋白表达水平的影响 | 第98-100页 |
| 6.4.9 Cat D和Cat B对Bid活化的影响 | 第100-101页 |
| 6.4.10 Rh2和Rh2-O对线粒体膜电势的影响 | 第101-103页 |
| 6.4.11 Rh2和Rh2-O诱导线粒体释放细胞色素C进入细胞质中 | 第103-104页 |
| 6.4.12 Rh2和Rh2-O激活caspase 9,caspase 3和PARP | 第104-106页 |
| 6.5 讨论 | 第106-108页 |
| 6.5.1 Rh2和Rh2-O通过死亡受体通路诱导HepG2细胞凋亡 | 第106页 |
| 6.5.2 细胞内活性氧水平失衡导致溶酶体膜通透化 | 第106-107页 |
| 6.5.3 溶酶体膜通透化是线粒体功能紊乱的上游通路 | 第107-108页 |
| 6.6 本章小结 | 第108-109页 |
| 第7章 Rh2和Rh2-O的体内抗肿瘤效果 | 第109-117页 |
| 7.1 引言 | 第109页 |
| 7.2 实验材料与仪器 | 第109-110页 |
| 7.2.1 动物与瘤株 | 第109页 |
| 7.2.2 实验材料 | 第109-110页 |
| 7.2.3 实验仪器 | 第110页 |
| 7.3 实验方法 | 第110-111页 |
| 7.3.1 造模 | 第110页 |
| 7.3.2 给药分组 | 第110页 |
| 7.3.3 观察指标 | 第110-111页 |
| 7.3.4 统计方法 | 第111页 |
| 7.4 结果与分析 | 第111-114页 |
| 7.4.1 小鼠的一般情况 | 第111页 |
| 7.4.2 小鼠的体重增长情况 | 第111-112页 |
| 7.4.3 胸腺、脾脏和肝脏的重量及脏器指数 | 第112-113页 |
| 7.4.4 肿瘤质量和抑瘤率 | 第113-114页 |
| 7.5 讨论 | 第114-116页 |
| 7.5.1 H22荷瘤小鼠模型的建立 | 第114-115页 |
| 7.5.2 Rh2和Rh2-O的体内抗肿瘤效果 | 第115页 |
| 7.5.3 Rh2和Rh2-O对荷瘤小鼠无毒副作用 | 第115-116页 |
| 7.6 本章小结 | 第116-117页 |
| 第8章 Rh2,Rh2辛酸酯的体内抗肿瘤机制研究 | 第117-135页 |
| 8.1 引言 | 第117页 |
| 8.2 实验材料与仪器 | 第117-118页 |
| 8.2.1 动物与瘤株 | 第117-118页 |
| 8.2.2 实验材料 | 第118页 |
| 8.2.3 实验仪器 | 第118页 |
| 8.3 实验方法 | 第118-122页 |
| 8.3.1 造模 | 第118-119页 |
| 8.3.2 分组给药 | 第119页 |
| 8.3.3 肿瘤细胞凋亡体 | 第119页 |
| 8.3.4 肿瘤组织苏木素-伊红染色(hematoxylin-esosin staining,H&E染色) | 第119-120页 |
| 8.3.5 免疫组化法检测VEGF,Bcl-2,Bax,Cleaved-caspase 3和Cleaved-caspase 9的蛋白表达水平 | 第120页 |
| 8.3.6 肿瘤组织总RNA的提取 | 第120-121页 |
| 8.3.7 实时荧光定量PCR检测Bcl-2和Bax的蛋白表达水平 | 第121页 |
| 8.3.8 ELISA检测细胞因子水平 | 第121页 |
| 8.3.9 流式细胞仪分析外周血淋巴细胞亚群 | 第121-122页 |
| 8.3.10 流式细胞仪检测NK细胞百分比 | 第122页 |
| 8.3.11 统计方法 | 第122页 |
| 8.4 结果与分析 | 第122-132页 |
| 8.4.1 肿瘤组织H&E染色 | 第122-123页 |
| 8.4.2 肿瘤组织TUNEL染色 | 第123-124页 |
| 8.4.3 Rh2和Rh2-O对凋亡相关蛋白表达的影响 | 第124-126页 |
| 8.4.4 荷瘤小鼠TNF-α ELISA检测结果 | 第126-127页 |
| 8.4.5 荷瘤小鼠IL-2 ELISA检测结果 | 第127-129页 |
| 8.4.6 荷瘤小鼠外周血淋巴细胞亚群流式细胞仪检测结果 | 第129-131页 |
| 8.4.7 Rh2和Rh2-O对VEGF产量的影响 | 第131-132页 |
| 8.5 讨论 | 第132-134页 |
| 8.5.1 Rh2-O和Rh2诱导肿瘤细胞凋亡 | 第132-133页 |
| 8.5.2 Rh2-O和Rh2引发肿瘤细胞线粒体功能紊乱 | 第133页 |
| 8.5.3 Rh2-O和Rh2改善荷瘤小鼠的免疫系统 | 第133-134页 |
| 8.5.4 Rh2和Rh2-O通过抑制肿瘤血管生成 | 第134页 |
| 8.6 本章小结 | 第134-135页 |
| 第9章 结论与展望 | 第135-138页 |
| 9.1 主要结论 | 第135-136页 |
| 9.2 主要创新点 | 第136-137页 |
| 9.3 进一步的研究方向 | 第137-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-154页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第154-155页 |
