| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| ·研究背景 | 第12-15页 |
| ·脂肪酶的分类及来源 | 第12页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第12-13页 |
| ·低温脂肪酶 | 第13-15页 |
| ·国内外研究进展 | 第15-20页 |
| ·产脂肪酶菌株的选育 | 第15-16页 |
| ·产脂肪酶微生物的发酵条件与培养基 | 第16-17页 |
| ·脂肪酶的分离纯化 | 第17-18页 |
| ·脂肪酶基因的克隆与表达 | 第18-20页 |
| ·本课题的依据与研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 低温脂肪酶高产菌株的筛选及鉴定 | 第22-29页 |
| ·前言 | 第22页 |
| ·材料与方法 | 第22-24页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·化学试剂 | 第22页 |
| ·实验仪器 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-24页 |
| ·结果 | 第24-27页 |
| ·产脂肪酶菌株的筛选 | 第24-25页 |
| ·菌株的形态学和生理生化特征 | 第25页 |
| ·产脂肪酶菌株基于16S rRNA基因序列的系统发育分析 | 第25-26页 |
| ·产脂肪酶菌株脂肪酸的含量 | 第26-27页 |
| ·产脂肪酶菌株G+C的含量 | 第27页 |
| ·讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 Burkholderia sp.SYBC LIP-Y产脂肪酶发酵条件优化 | 第29-49页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·材料与方法 | 第29-31页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·化学试剂 | 第29页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-31页 |
| ·结果 | 第31-46页 |
| ·发酵培养基的初步优化 | 第31-35页 |
| ·发酵培养基的初步优化 | 第35-38页 |
| ·利用响应面法优化Burkholderia sp.SYBC LIP-Y脂肪酶液态发酵培养基 | 第38-42页 |
| ·发酵罐放大实验 | 第42-46页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 Burkholderia sp.SYBC LIP-Y脂肪酶的分离纯化和酶学性质 | 第49-63页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-52页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·实验仪器 | 第49页 |
| ·化学试剂 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·结果 | 第52-61页 |
| ·脂肪酶的同工酶谱 | 第52页 |
| ·脂肪酶的纯化 | 第52-57页 |
| ·脂肪酶的分子量 | 第57页 |
| ·Burkholderia sp.SYBC LIP-Y脂肪酶的最适pH及pH稳定性 | 第57-58页 |
| ·Burkholderia sp.SYBC LIP-Y脂肪酶的的最适温度及热稳定性 | 第58页 |
| ·金属离子对Burkholderia sp.SYBC LIP-Y脂肪酶活性的影响 | 第58-59页 |
| ·表面活性剂对Burkholderia sp.SYBC LIP-Y脂肪酶活性的影响 | 第59页 |
| ·Burkholderia sp.SYBC LIP-Y脂肪酶有机溶剂耐受性 | 第59-60页 |
| ·Burkholderia sp.SYBC LIP-Y脂肪酶的酶学动力学 | 第60页 |
| ·Burkholderia sp.SYBC LIP-Y脂肪酶对不同底物的水解能力 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第五章 十二烷促进Burkholderia sp.SYBC LIP-Y产脂肪酶的机理研究 | 第63-73页 |
| ·前言 | 第63页 |
| ·材料与方法 | 第63-64页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·化学试剂 | 第63页 |
| ·实验仪器 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-64页 |
| ·结果 | 第64-70页 |
| ·烷烃溶剂对Burkholderia sp.SYBC LIP-Y脂肪酶酶活力的影响 | 第64-65页 |
| ·烷烃溶剂对Burkholderia sp.SYBC LIP-Y菌株生长的影响 | 第65页 |
| ·烷烃溶剂对Burkholderia sp.SYBC LIP-Y产酶的影响 | 第65-66页 |
| ·十二烷对Burkholderia sp.SYBC LIP-Y产酶的影响 | 第66页 |
| ·Burkholderia sp.SYBC LIP-Y发酵产酶曲线 | 第66-67页 |
| ·丙二醛(MDA)含量变化 | 第67页 |
| ·过氧化氢水平的变化 | 第67-68页 |
| ·维生素C含量变化 | 第68页 |
| ·抑制羟自由基能力(RAHFR)的变化 | 第68-69页 |
| ·总抗氧化力水平(T-AOC)的变化 | 第69页 |
| ·CAT活力变化 | 第69-70页 |
| ·SOD活力变化 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-73页 |
| 第六章 Burkholderia sp.SYBC LIP-Y低温脂肪酶基因的克隆、表达及序列分析 | 第73-86页 |
| ·前言 | 第73页 |
| ·材料与方法 | 第73-76页 |
| ·菌株与载体 | 第73页 |
| ·酶及化学试剂 | 第73页 |
| ·实验仪器 | 第73页 |
| ·培养基 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-76页 |
| ·结果 | 第76-85页 |
| ·Burkholderia sp.SYBC LIP-Y基因组DNA的提取 | 第76页 |
| ·低温脂肪酶基因的克隆 | 第76-78页 |
| ·Burkholderia sp.SYBC LIP-Y脂肪酶基因的BLAST同源性分析 | 第78页 |
| ·Lip蛋白的同源性分析及序列比对 | 第78-79页 |
| ·脂肪酶基因序列与蛋白序列的进化树的分析 | 第79-80页 |
| ·LIP蛋白信号肽分析 | 第80-81页 |
| ·低温脂肪酶的三级结构预测 | 第81-83页 |
| ·PCR产物电泳图 | 第83页 |
| ·脂肪酶基因表达载体的构建 | 第83页 |
| ·转化子的鉴定 | 第83-84页 |
| ·脂肪酶基因在大肠杆菌BL21中的诱导表达 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| 第七章 主要结论与展望 | 第86-88页 |
| ·主要结论 | 第86-87页 |
| ·展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-97页 |
| 论文创新点 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 附录1 16S rRNA基因序列 | 第99-100页 |
| 附录2 脂肪酶基因序列 | 第100-101页 |
| 附录3 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第101页 |
