| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 α-酮戊二酸的理化性质及应用 | 第9-10页 |
| 1.2.1 α-酮戊二酸的理化性质 | 第9-10页 |
| 1.3 α-酮戊二酸的生产概况 | 第10-12页 |
| 1.3.1 α-酮戊二酸的生产方法与现状 | 第10-11页 |
| 1.3.2 α-酮戊二酸的发酵生产菌株 | 第11-12页 |
| 1.4 α-酮戊二酸的生物合成途径及调控机制 | 第12-14页 |
| 1.4.1 α-酮戊二酸的代谢合成途径 | 第12-13页 |
| 1.4.2 α-酮戊二酸的生物合成的调节机制 | 第13-14页 |
| 1.4.3 α-酮戊二酸生物合成的回补途径 | 第14页 |
| 1.5 α-酮戊二酸生产菌的育种思路 | 第14-15页 |
| 1.6 α-酮戊二酸发酵优化策略 | 第15-16页 |
| 1.6.1 α-酮戊二酸发酵的碳源物质 | 第15页 |
| 1.6.2 α-酮戊二酸发酵的氮源物质 | 第15-16页 |
| 1.6.3 α-酮戊二酸发酵的其他营养物质 | 第16页 |
| 1.7 α-酮戊二酸的测定方法 | 第16-17页 |
| 1.7.1 分光光度计法 | 第16页 |
| 1.7.2 酶反应法 | 第16-17页 |
| 1.7.3 试剂盒法 | 第17页 |
| 1.7.4 高效液相色谱法 | 第17页 |
| 1.8 论文立题背景及主要研究内容 | 第17-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第22-23页 |
| 2.1.5 培养基(g/L) | 第23页 |
| 2.1.6 抗生素 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-33页 |
| 2.2.1 谷氨酸棒杆菌基因组的提取 | 第24页 |
| 2.2.2 质粒提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 DNA纯化 | 第25页 |
| 2.2.4 目的基因的扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.5 大肠杆菌化转感受态的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.6 谷氨酸棒状杆菌电转感受态的制备 | 第27页 |
| 2.2.7 重组质粒的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.8 重组菌株的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.9 荧光定量PCR | 第30-31页 |
| 2.2.10 分批补料发酵培养 | 第31页 |
| 2.2.11 培养液pH的测定 | 第31页 |
| 2.2.12 残糖的测定 | 第31-32页 |
| 2.2.13 发酵液中有机酸的测定 | 第32页 |
| 2.2.14 发酵液中氨基酸的测定 | 第32页 |
| 2.2.15 数据分析 | 第32-33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-57页 |
| 3.1 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的改造对C.glutamicum合成积累α-KG的影响 | 第33-42页 |
| 3.1.1 重组菌株GDK-11、GDK-12和GDK-13的构建 | 第33-38页 |
| 3.1.2 重组菌株GDK-11、GDK-12和GDK-13中基因pepc的相对表达量检测 | 第38-39页 |
| 3.1.3 7.5 L罐分批补料发酵实验 | 第39-42页 |
| 3.1.4 重组菌株GDK-11、GDK-12和GDK-13的发酵结果总结 | 第42页 |
| 3.2 谷氨酸棒状杆菌合成积累α-KG支路代谢的改造 | 第42-57页 |
| 3.2.1 缺失乳酸合成途径对C.glutamicum合成积累α-KG的影响 | 第42-45页 |
| 3.2.2 缺失乙酸合成途径对C.glutamicum合成积累α-KG的影响 | 第45-50页 |
| 3.2.3 削弱琥珀酸合成途径对C.glutamicum合成积累α-KG的影响 | 第50-53页 |
| 3.2.4 pqo、pknG和aceA的复合敲除对C.glutamicum合成积累α-KG的影响 | 第53-56页 |
| 3.2.5 C.glutamicum合成积累α-KG支路代谢改造的发酵结果总结 | 第56-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 5 展望 | 第58-59页 |
| 6 参考文献 | 第59-65页 |
| 7 研究生期间所发表论文情况 | 第65-66页 |
| 8 致谢 | 第66页 |
