| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-19页 |
| 1.1 木质纤维素 | 第8页 |
| 1.2 木质纤维素降解酶类 | 第8-9页 |
| 1.3 β-甘露聚糖酶 | 第9-13页 |
| 1.3.1 β-甘露聚糖酶的来源及性质 | 第9页 |
| 1.3.2 β-甘露聚糖酶的作用机制 | 第9-10页 |
| 1.3.3 β-甘露聚糖酶的国内外研究进展 | 第10-12页 |
| 1.3.4 β-甘露聚糖酶的应用 | 第12-13页 |
| 1.4 里氏木霉 | 第13-14页 |
| 1.5 毕赤酵母表达系统简介 | 第14-16页 |
| 1.5.1 毕赤酵母表达系统的优点 | 第14页 |
| 1.5.2 毕赤酵母表达宿主 | 第14-15页 |
| 1.5.3 毕赤酵母表达载体 | 第15页 |
| 1.5.4 外源基因的整合与转化 | 第15-16页 |
| 1.5.5 影响毕赤酵母中外源蛋白表达的因素 | 第16页 |
| 1.6 蛋白质糖基化的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.7 课题的立题背景及研究内容 | 第18-19页 |
| 1.7.1 立题背景 | 第18页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 常用培养基和主要溶液 | 第20-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-35页 |
| 2.2.1 β-甘露聚糖酶基因克隆 | 第22-25页 |
| 2.2.2 毕赤酵母重组表达载体的构建与验证 | 第25-26页 |
| 2.2.3 转化和筛选毕赤酵母重组子 | 第26-27页 |
| 2.2.4 重组毕赤酵母的诱导表达 | 第27页 |
| 2.2.5 重组甘露聚糖酶的纯化和去糖基化分析 | 第27-28页 |
| 2.2.6 重组甘露聚糖酶的结构分析 | 第28-29页 |
| 2.2.7 重组甘露聚糖酶的酶学性质分析 | 第29-30页 |
| 2.2.8 吸附实验 | 第30页 |
| 2.2.9 协同纤维素酶水解实验 | 第30-31页 |
| 2.2.10 N-糖基化对重组甘露聚糖酶的影响 | 第31-35页 |
| 2.3 分析方法 | 第35-40页 |
| 2.3.1 酶活测定 | 第35-37页 |
| 2.3.2 蛋白分析 | 第37-38页 |
| 2.3.3 木质纤维素含量的测定 | 第38-39页 |
| 2.3.4 总还原糖含量的测定 | 第39页 |
| 2.3.5 单糖含量的测定 | 第39-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-60页 |
| 3.1 β-甘露聚糖酶基因重组毕赤酵母的构建与表达 | 第40-46页 |
| 3.1.1 总RNA的提取 | 第40页 |
| 3.1.2 甘露聚糖酶基因成熟肽编码序列的克隆 | 第40-41页 |
| 3.1.3 重组表达载体的构建与验证 | 第41-42页 |
| 3.1.4 重组毕赤酵母的筛选和诱导表达 | 第42页 |
| 3.1.5 重组甘露聚糖酶的纯化与蛋白分析 | 第42-44页 |
| 3.1.6 圆二色谱与三维结构 | 第44-46页 |
| 3.1.7 小结 | 第46页 |
| 3.2 重组Man1和Man1△CBM的酶学性质 | 第46-51页 |
| 3.2.1 最适pH值及pH值稳定性 | 第46-47页 |
| 3.2.2 最适温度及温度稳定性 | 第47-48页 |
| 3.2.3 EDTA及金属离子的影响 | 第48-49页 |
| 3.2.4 比活力和动力学常数 | 第49-50页 |
| 3.2.5 小结 | 第50-51页 |
| 3.3 重组酶协同纤维素酶水解反应的研究 | 第51-55页 |
| 3.3.1 重组酶的吸附性能研究 | 第51-52页 |
| 3.3.2 重组酶协同纤维素酶水解木质纤维素材料的影响 | 第52-55页 |
| 3.3.3 小结 | 第55页 |
| 3.4 去N-糖基化位点对重组Man1的影响 | 第55-60页 |
| 3.4.1 突变体的构建 | 第55-57页 |
| 3.4.2 三种突变体与重组Man1的比较 | 第57-59页 |
| 3.4.3 小结 | 第59-60页 |
| 4 结论 | 第60-61页 |
| 5 展望 | 第61-62页 |
| 6 参考文献 | 第62-69页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第69-70页 |
| 8 致谢 | 第70页 |