| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表（Abbreviations） | 第7-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 乳制品食源性致病菌的研究进展 | 第11页 |
| 1.2 乳制品中的常见致病菌及常规检测技术 | 第11-16页 |
| 1.2.1 常规 PCR 技术 | 第12-13页 |
| 1.2.2 多重 PCR 技术 | 第13-15页 |
| 1.2.3 实时荧光定量 PCR 技术 | 第15-16页 |
| 1.2.4 环介导等温扩增技术 | 第16页 |
| 1.3 核酸交联染料结合 PCR 技术 | 第16-18页 |
| 1.3.1 样品处理时 PMA/EMA 浓度的优化 | 第17页 |
| 1.3.2 曝光时间对检测效果的影响 | 第17-18页 |
| 1.3.3 菌悬液浓度对核酸交联剂处理样品的效果的影响 | 第18页 |
| 1.4 免疫学技术 | 第18-20页 |
| 1.4.1 酶联免疫吸附技术 | 第19页 |
| 1.4.2 免疫磁珠分离技术 | 第19-20页 |
| 1.5 研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 PMA-mPCR检测方法的建立及优化 | 第21-42页 |
| 2.1 前言 | 第21-22页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第22-24页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第22-23页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.2.3 主要实验试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.3.1 菌株的培养 | 第24页 |
| 2.3.2 引物的设计 | 第24-25页 |
| 2.3.3 细菌DNA模板的提取 | 第25页 |
| 2.3.4 mPCR条件的优化 | 第25-27页 |
| 2.3.5 PMA效果的验证 | 第27-28页 |
| 2.3.6 纯培养液中PMA-mPCR体系最低检出限的测定 | 第28页 |
| 2.3.7 乳制品加标样本中PMA-mPCR体系最低检出限的测定 | 第28-29页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第29-41页 |
| 2.4.1 引物退火温度优化结果 | 第29-31页 |
| 2.4.2 引物特异性验证结果 | 第31-32页 |
| 2.4.3 引物浓度优化结果 | 第32-33页 |
| 2.4.4 mPCR体系优化结果 | 第33-35页 |
| 2.4.5 PMA效果验证结果 | 第35-37页 |
| 2.4.6 纯培养液最低检测限结果 | 第37-39页 |
| 2.4.7 乳制品加标样本中PMA-mPCR体系最低检出限的确定 | 第39-41页 |
| 2.5 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 实际样品检测国标方法与PMA-mPCR方法的对比 | 第42-49页 |
| 3.1 前言 | 第42-43页 |
| 3.2 国标传统培养法的结果 | 第43-45页 |
| 3.2.1 沙门菌的检测 | 第43页 |
| 3.2.2 蜡样芽孢杆菌的检测 | 第43-44页 |
| 3.2.3 克罗诺杆菌的检测 | 第44-45页 |
| 3.2.4 传统国标方法检测的结果 | 第45页 |
| 3.3 PMA-mPCR方法检测结果 | 第45-48页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 三重PCR检测试剂盒的设计、组装和应用 | 第49-54页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第49页 |
| 4.2 试剂盒的组装 | 第49-50页 |
| 4.3 重复性试验 | 第50-51页 |
| 4.3.1 批内重复性试验 | 第50页 |
| 4.3.2 批间重复性试验 | 第50-51页 |
| 4.4 稳定性试验 | 第51-52页 |
| 4.5 保存期试验 | 第52页 |
| 4.6 试剂盒的应用 | 第52-53页 |
| 4.7 讨论与小结 | 第53-54页 |
| 第五章 结论与展望 | 第54-56页 |
| 5.1 结论 | 第54-55页 |
| 5.2 展望 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录A1 乳制品中三种致病菌多重PCR检测试剂盒使用说明书 | 第64-67页 |
| 附录A2 实验试剂与材料 | 第67-68页 |
| 附录A3 实验仪器设备 | 第68-69页 |
| 个人简介 | 第69页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第69页 |
