| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 溶菌酶 | 第11-12页 |
| 1.1.1 简介 | 第11页 |
| 1.1.2 溶菌酶的性质及作用机理 | 第11-12页 |
| 1.1.3 溶菌酶的分类 | 第12页 |
| 1.2 i型溶菌酶中的异构肽酶活性 | 第12-13页 |
| 1.3 溶菌酶的应用 | 第13-15页 |
| 1.3.1 溶菌酶在食品行业的应用 | 第13页 |
| 1.3.2 溶菌酶在医疗行业中的应用 | 第13-14页 |
| 1.3.3 溶菌酶在生物工程研究中的的应用 | 第14页 |
| 1.3.4 溶菌酶在饲料添加中的应用 | 第14-15页 |
| 1.4 外源蛋白在大肠杆菌表达系统中的表达 | 第15-16页 |
| 1.5 溶菌酶蛋白的分离纯化方法 | 第16-18页 |
| 1.5.1 结晶法 | 第16页 |
| 1.5.2 透析和超过滤 | 第16页 |
| 1.5.3 亲和层析 | 第16-17页 |
| 1.5.4 离子交换层析 | 第17页 |
| 1.5.5 反胶束萃取法 | 第17-18页 |
| 1.6 研究内容、目的和意义 | 第18-19页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第18页 |
| 1.6.2 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 重组海参溶菌酶C端多肽异构肽酶活性分析 | 第19-37页 |
| 2.1 材料和仪器 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌种和试剂 | 第19页 |
| 2.1.2 培养基 | 第19页 |
| 2.1.3 细胞培养常用溶液 | 第19-20页 |
| 2.1.4 蛋白分离纯化常用溶液和缓冲液 | 第20-21页 |
| 2.1.5 SDS-PAGE电泳常用溶液和缓冲液 | 第21-22页 |
| 2.1.6 rSjLys-C异构肽酶活性分析常用溶液和缓冲液 | 第22页 |
| 2.1.7 仪器和设备 | 第22-23页 |
| 2.2 方法和步骤 | 第23-30页 |
| 2.2.1 氨基酸序列同源性分析 | 第23-24页 |
| 2.2.2 rSjLys-C的诱导表达、分离纯化和SDS-PSGE分析 | 第24-28页 |
| 2.2.3 rSjLys-C异构肽酶活性的检测 | 第28页 |
| 2.2.4 检测PMSF对rSjLys-C蛋白异构肽活性的抑制作用 | 第28页 |
| 2.2.5 分析影响rSjLys-C蛋白异构肽酶活性的因素 | 第28-29页 |
| 2.2.6 酶反应动力学分析 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-36页 |
| 2.3.1 Sj Lys-C氨基酸残基与其他异构肽酶序列同源性分析 | 第30-31页 |
| 2.3.2 rSjLys-C蛋白的分离纯化及鉴定 | 第31页 |
| 2.3.3 rSjLys-C异构肽酶活性的检测 | 第31-32页 |
| 2.3.4 rSjLys-C异构肽酶活性位点 | 第32-33页 |
| 2.3.5 分析rSjLys-C异构肽酶活性的影响因素 | 第33-34页 |
| 2.3.6 rSjLy-C异构肽酶酶促反应动力学分析 | 第34-36页 |
| 2.4 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 重组海参溶菌酶C端多肽可溶性表达的研究 | 第37-58页 |
| 3.1 材料和仪器 | 第37-40页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 3.1.3 培养基 | 第37-38页 |
| 3.1.4 常用溶液及缓冲液 | 第38页 |
| 3.1.5 SDS-PAGE电泳常用溶液和缓冲液 | 第38-39页 |
| 3.1.6 主要仪器和设备 | 第39-40页 |
| 3.2 方法和步骤 | 第40-48页 |
| 3.2.1 可溶性预测 | 第40页 |
| 3.2.2 引物的设计 | 第40-41页 |
| 3.2.3 目的片段的扩增 | 第41-42页 |
| 3.2.4 目的片段的连接与转化 | 第42页 |
| 3.2.5 重组克隆质粒的菌落PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.6 重组表达质粒的构建 | 第43-46页 |
| 3.2.7 表达工程菌的构建 | 第46-47页 |
| 3.2.8 重组海参溶菌酶C端多肽的表达及分析 | 第47页 |
| 3.2.9 诱导条件对重组海参溶菌酶C端多肽表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-56页 |
| 3.3.1 可溶性预测结果 | 第48页 |
| 3.3.2 重组克隆质粒的构建 | 第48-50页 |
| 3.3.3 重组表达质粒的构建 | 第50-53页 |
| 3.3.4 重组海参溶菌酶C端多肽的诱导表达 | 第53-56页 |
| 3.4 本章小结 | 第56-58页 |
| 第四章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64页 |
