| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-25页 |
| ·利巴韦林的介绍 | 第10页 |
| ·利巴韦林的理化性质 | 第10页 |
| ·利巴韦林的用途及抗病毒机制 | 第10页 |
| ·利巴韦林的生产方法 | 第10-13页 |
| ·化学合成法 | 第11-12页 |
| ·微生物酶法 | 第12页 |
| ·发酵合成法 | 第12-13页 |
| ·利巴韦林发酵生物合成途径 | 第13-14页 |
| ·发酵法生产利巴韦林的研究概况 | 第13页 |
| ·发酵法生产利巴韦林的合成途径 | 第13-14页 |
| ·利巴韦林合成途径关键酶的介绍 | 第14-18页 |
| ·PRPP合成酶 | 第14页 |
| ·PRPP转酰胺酶 | 第14-15页 |
| ·IMP脱氢酶 | 第15页 |
| ·GMP合成酶 | 第15页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶 | 第15-17页 |
| ·磷酸戊糖变位酶 | 第17-18页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统概述 | 第18-21页 |
| ·枯草芽孢杆菌的优越性 | 第18页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统中表达载体概述 | 第18-20页 |
| ·枯草芽孢杆菌分泌胞外蛋白酶的研究进展 | 第20-21页 |
| ·利巴韦林枯草芽孢杆菌发酵工艺优化的研究 | 第21-23页 |
| ·枯草芽孢杆菌发酵工艺的研究概况 | 第21页 |
| ·酵母抽提物对枯草芽孢杆菌核苷发酵的影响 | 第21-23页 |
| ·论文的立题背景和研究内容 | 第23-25页 |
| ·立题背景 | 第23页 |
| ·研究内容 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-43页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·质粒 | 第25页 |
| ·菌株 | 第25-26页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第26-30页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-28页 |
| ·主要溶液 | 第28-29页 |
| ·主要培养基 | 第29-30页 |
| ·抗生素 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-39页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌基因组的提取 | 第30-31页 |
| ·质粒的小剂量提取 | 第31页 |
| ·基因扩增 | 第31-32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| ·DNA纯化回收 | 第32-33页 |
| ·DNA的酶切 | 第33页 |
| ·连接与转化 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第34-35页 |
| ·转化子鉴定 | 第35页 |
| ·测序 | 第35页 |
| ·RNA提取 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE实验 | 第37-38页 |
| ·蛋白浓度定量 | 第38页 |
| ·酶活性测定 | 第38-39页 |
| ·发酵实验 | 第39页 |
| ·分析方法 | 第39-43页 |
| ·生物量的测定 | 第39页 |
| ·菌体干重的计算 | 第39-40页 |
| ·培养液pH的测定 | 第40页 |
| ·残糖的测定 | 第40页 |
| ·腺嘌呤和次黄嘌呤的测定 | 第40页 |
| ·利巴韦林的测定 | 第40页 |
| ·鸟苷的测定 | 第40-41页 |
| ·氨基酸的测定 | 第41-42页 |
| ·数据分析 | 第42-43页 |
| 3 结果与讨论 | 第43-68页 |
| ·腺嘌呤限量供应对利巴韦林发酵的影响 | 第43-52页 |
| ·三种酵母抽提物的氨基酸成分分析 | 第44页 |
| ·不同的腺嘌呤供体对利巴韦林发酵的影响 | 第44-46页 |
| ·Springer 2506浓度对利巴韦林发酵的影响 | 第46-48页 |
| ·不同初始腺嘌呤浓度对利巴韦林发酵的影响 | 第48-51页 |
| ·Springer 2506分批补料发酵过程分析 | 第51-52页 |
| ·pupG基因过表达工程菌株的构建及验证 | 第52-57页 |
| ·胞内表达载体pWE980-pupG和胞外表达载体pWB980-pupG的构建 | 第53-54页 |
| ·工程菌B.amyloliquefaciens TA2081和TA2082的构建及鉴定 | 第54-55页 |
| ·工程菌B.amyloliquefaciens TA2081和TA2082的产酶验证 | 第55-56页 |
| ·摇瓶发酵验证 | 第56-57页 |
| ·pupG基因整合工程菌株的构建及验证 | 第57-66页 |
| ·整合质粒的构建 | 第58-61页 |
| ·工程菌B.amyloliquefaciens TA2083的构建 | 第61-64页 |
| ·pupG基因转录分析 | 第64页 |
| ·PNPase酶活性分析 | 第64-65页 |
| ·摇瓶发酵验证 | 第65-66页 |
| ·三株工程菌7.5 L发酵罐发酵参数比较 | 第66-68页 |
| 4 结论 | 第68-69页 |
| 5 展望 | 第69-70页 |
| 6 参考文献 | 第70-77页 |
| 7 攻读学位期间发表的文章 | 第77-78页 |
| 8 致谢 | 第78页 |
