| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表Abbreviation | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-33页 |
| 1.1 丙烯酰胺的基本性质及来源 | 第18页 |
| 1.2 丙烯酰胺人均日常暴露量 | 第18页 |
| 1.3 丙烯酰胺体内吸收、代谢、分布 | 第18-20页 |
| 1.4 丙烯酰胺毒理性质 | 第20-21页 |
| 1.4.1 神经毒性 | 第20页 |
| 1.4.2 肝脏毒性 | 第20-21页 |
| 1.4.3 致癌性 | 第21页 |
| 1.5 丙烯酰胺毒性与氧化应激关系 | 第21-22页 |
| 1.6 氧化应激相关通路研究 | 第22-26页 |
| 1.6.1 线粒体能量代谢与氧化还原平衡 | 第22-23页 |
| 1.6.2 Nrf2 | 第23-24页 |
| 1.6.3 NF-κB | 第24页 |
| 1.6.4 Nrf2与NF-κB的相互作用 | 第24-25页 |
| 1.6.5 细胞凋亡及相关通路 | 第25-26页 |
| 1.7 模型选择 | 第26-27页 |
| 1.7.1 星型胶质细胞模型 | 第26-27页 |
| 1.7.2 小胶质细胞模型 | 第27页 |
| 1.8 蛋白组学在毒理学中的应用及研究进展 | 第27-29页 |
| 1.8.1 蛋白组学技术手段 | 第28页 |
| 1.8.2 蛋白组学在机制研究中的应用 | 第28页 |
| 1.8.3 蛋白组学在临床与疾病相关研究的应用 | 第28-29页 |
| 1.8.4 蛋白组学在鉴别与筛选生物标志物研究中的应用 | 第29页 |
| 1.9 花色苷抗氧化活性研究进展 | 第29-30页 |
| 1.10 研究意义及内容 | 第30-33页 |
| 1.10.1 研究意义 | 第30页 |
| 1.10.2 研究内容 | 第30-32页 |
| 1.10.3 技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 细胞模型的建立 | 第33-41页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第33-35页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第33页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第33-34页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-38页 |
| 2.2.1 杂交瘤细胞培养 | 第35页 |
| 2.2.2 小鼠全脑原代胶质细胞混合培养 | 第35-36页 |
| 2.2.3 分离纯化星型胶质及小胶质细胞 | 第36页 |
| 2.2.4 免疫荧光鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.5 星型胶质细胞的传代 | 第37页 |
| 2.2.6 星型胶质细胞的冻存 | 第37页 |
| 2.2.7 星型胶质细胞的复苏 | 第37-38页 |
| 2.3 结果及讨论 | 第38-40页 |
| 2.3.1 原代混合胶质细胞生成过程 | 第38页 |
| 2.3.2 原代胶质细胞及小胶质细胞荧光纯度鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.3 原代胶质细胞及小胶质细胞共培养 | 第39-40页 |
| 2.4 结论 | 第40-41页 |
| 第三章 丙烯酰胺神经毒性制毒通路初探 | 第41-72页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第41-44页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第41-43页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第43-44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-57页 |
| 3.2.1 试剂的配制 | 第44-46页 |
| 3.2.2 MTT法检测细胞存活率 | 第46-47页 |
| 3.2.3 H_2DC-FDA法检测细胞活性氧水平 | 第47页 |
| 3.2.4 细胞毒性LDH测定 | 第47-48页 |
| 3.2.5 细胞还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽比率的测定 | 第48页 |
| 3.2.6 细胞蛋白浓度测定 | 第48-49页 |
| 3.2.7 氧化产物4-HNE含量测定 | 第49-50页 |
| 3.2.8 氧化产物8-OHdG含量测定 | 第50页 |
| 3.2.9 转录因子Nrf2、NF-κB免疫荧光检测 | 第50-51页 |
| 3.2.10 12种细胞因子含量测定 | 第51-52页 |
| 3.2.11 Western Blot检测 | 第52-53页 |
| 3.2.12 PCR检测 | 第53-57页 |
| 3.2.13 数据统计及分析方法 | 第57页 |
| 3.3 结果及讨论 | 第57-71页 |
| 3.3.1 AA对星型胶质及小胶质细胞存活率的影响 | 第57-59页 |
| 3.3.2 AA对星型胶质及小胶质细胞LDH释放的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.3 AA诱导星型胶质及小胶质细胞内ROS产生 | 第60-61页 |
| 3.3.4 AA对星型胶质及小胶质细胞GSH/GSSG的影响 | 第61-62页 |
| 3.3.5 AA诱导星型胶质及小胶质细胞中过氧化物4-HNE和8-OHdG的产生 | 第62-64页 |
| 3.3.6 AA诱导星型胶质及小胶质细胞中NF-κB,Nrf2激活及转移 | 第64-66页 |
| 3.3.7 AA诱导星型胶质及小胶质细胞中细胞因子的释放 | 第66-67页 |
| 3.3.8 AA诱导星型胶质及小胶质细胞中NF-κB,Nrf2下游基因激活 | 第67页 |
| 3.3.9 AA对星型胶质及小胶质细胞中Nrf2下游基因蛋白水平调控 | 第67-70页 |
| 3.3.10 AA毒性对两种胶质细胞的影响及毒性机制 | 第70-71页 |
| 3.4 小结 | 第71-72页 |
| 第四章 星型胶质/小胶质共培养模型对丙烯酰胺神经毒性的影响 | 第72-84页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第72页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第72页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第72页 |
| 4.2 实验方法 | 第72-74页 |
| 4.2.1 试剂的配制 | 第72页 |
| 4.2.2 细胞培养 | 第72页 |
| 4.2.3 MTT法检测细胞存活率 | 第72-73页 |
| 4.2.4 H_2DC-FDA法检测细胞活性氧水平 | 第73页 |
| 4.2.5 细胞毒性LDH测定 | 第73页 |
| 4.2.6 细胞还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽比率的测定 | 第73页 |
| 4.2.7 细胞蛋白浓度测定 | 第73页 |
| 4.2.8 氧化产物4-HNE含量测定 | 第73页 |
| 4.2.9 氧化产物8-OHdG含量测定 | 第73页 |
| 4.2.10 12种细胞因子含量测定 | 第73页 |
| 4.2.11 Western Blot检测 | 第73页 |
| 4.2.12 PCR检测 | 第73页 |
| 4.2.13 数据统计及分析方法 | 第73-74页 |
| 4.3 结果及讨论 | 第74-83页 |
| 4.3.1 AA对共培养细胞存活率的影响 | 第74-75页 |
| 4.3.2 AA对共培养细胞LDH释放的影响 | 第75-76页 |
| 4.3.3 AA诱导共培养细胞内ROS产生 | 第76页 |
| 4.3.4 AA对共培养细胞GSH/GSSG的影响 | 第76-78页 |
| 4.3.5 AA诱导共培养细胞中过氧化物4-HNE和8-OHdG的产生 | 第78页 |
| 4.3.6 AA诱导共培养细胞中NF-κB,Nrf2激活及转移 | 第78-79页 |
| 4.3.7 AA诱导共培养细胞因子的释放 | 第79-80页 |
| 4.3.8 AA诱导共培养细胞中NF-κB,Nrf2下游基因激活 | 第80-81页 |
| 4.3.9 AA对共培养细胞中Nrf2下游基因蛋白水平调控 | 第81-83页 |
| 4.3.10 比较AA对共培养与纯培养细胞的毒性反应 | 第83页 |
| 4.4 小结 | 第83-84页 |
| 第五章 基于蛋白组学对丙烯酰胺神经毒性靶点的研究 | 第84-101页 |
| 5.1 实验材料与仪器 | 第84-85页 |
| 5.1.1 实验试剂及耗材 | 第84页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第84-85页 |
| 5.2 实验方法 | 第85-87页 |
| 5.2.1 试剂的配制 | 第85页 |
| 5.2.2 细胞培养与染毒分组 | 第85页 |
| 5.2.3 蛋白提取 | 第85-86页 |
| 5.2.4 样品前处理 | 第86页 |
| 5.2.5 UPLC/Q-TOF | 第86页 |
| 5.2.6 生物信息学处理 | 第86-87页 |
| 5.2.7 报告蛋白的细胞成分及功能分类 | 第87页 |
| 5.2.8 功能注释及富集分析 | 第87页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第87-99页 |
| 5.3.1 蛋白识别与差异展示 | 第87-91页 |
| 5.3.2 相应细胞成分分布 | 第91-93页 |
| 5.3.3 差异表达蛋白的功能富集分析 | 第93-96页 |
| 5.3.4 相关经典通路分析 | 第96-98页 |
| 5.3.5 相关上下游效应预测举例 | 第98页 |
| 5.3.6 蛋白相互作用网络预测举例 | 第98-99页 |
| 5.4 结论 | 第99-101页 |
| 第六章 丙烯酰胺氧化应激的线粒体机制及蓝莓花色昔提取物对其的干预作用 | 第101-112页 |
| 6.1 实验材料与仪器 | 第101-102页 |
| 6.1.1 实验试剂 | 第101页 |
| 6.1.2 实验仪器 | 第101-102页 |
| 6.2 实验方法 | 第102-105页 |
| 6.2.1 试剂的配制 | 第102页 |
| 6.2.2 实验动物分组 | 第102-103页 |
| 6.2.3 实验动物染毒 | 第103页 |
| 6.2.4 肝脏线粒体的提取 | 第103页 |
| 6.2.5 线粒体复合体Ⅰ-Ⅴ酶活测定 | 第103-104页 |
| 6.2.6 ATP酶活测定 | 第104页 |
| 6.2.7 线粒体内膜功能电位测定 | 第104页 |
| 6.2.8 线粒体膜通道孔功能测定 | 第104页 |
| 6.2.9 线粒体肿胀测定 | 第104页 |
| 6.2.10 ROS、NAO测定 | 第104-105页 |
| 6.2.11 BCA法测蛋白 | 第105页 |
| 6.2.13 数据统计 | 第105页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第105-110页 |
| 6.3.1 蓝莓花色苷提取物对AA染毒小鼠肝脏线粒体复合物及ATP水解酶酶活的 | 第105-106页 |
| 6.3.2 蓝莓花色苷提取物对AA染毒小鼠肝脏线粒体氧化应激的影响 | 第106-107页 |
| 6.3.3 蓝莓花色苷提取物对AA染毒小鼠肝脏线粒体内外膜功能的影响 | 第107-109页 |
| 6.3.4 AA诱发氧化应激的线粒体机制及花色昔可能存在的干预机制 | 第109-110页 |
| 6.4 结论 | 第110-112页 |
| 第七章 全文总结与展望 | 第112-115页 |
| 7.1 全文总结 | 第112-113页 |
| 7.2 创新点 | 第113页 |
| 7.3 展望 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-135页 |
| 附录 | 第135-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
| 作者简介 | 第138-139页 |
