| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 本论文的缩写词表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-38页 |
| ·糖蛋白介绍 | 第15-20页 |
| ·糖蛋白结构 | 第15-17页 |
| ·N-连接糖蛋白 | 第15-16页 |
| ·O-连接糖蛋白 | 第16-17页 |
| ·糖蛋白的功能 | 第17页 |
| ·糖蛋白的合成 | 第17-20页 |
| ·N-糖蛋白的合成 | 第17-19页 |
| ·O-糖蛋白的合成 | 第19-20页 |
| ·糖蛋白的降解 | 第20页 |
| ·寡糖链的重要作用及制备 | 第20-25页 |
| ·寡糖链在细胞粘附和装配等过程中的作用 | 第20-22页 |
| ·寡糖链是许多糖缀合物发挥生物功能所必需的 | 第20页 |
| ·糖缀合物通过寡糖链的识别决定着细胞的识别、集聚及受体作用 | 第20-21页 |
| ·寡糖链的识别决定着糖缀合物的组装、转运、消化失活及分类储藏 | 第21页 |
| ·大多数微生物在细胞表面的黏附是由糖链介导的 | 第21-22页 |
| ·寡糖链对糖蛋白的作用 | 第22-23页 |
| ·蛋白的糖基化大大增强蛋白质的体外、体内的稳定性 | 第22页 |
| ·糖链在新生肽链折叠过程中的作用 | 第22-23页 |
| ·糖链对糖蛋白水溶性的影响 | 第23页 |
| ·N-糖苷制备的研究现状 | 第23-25页 |
| ·糖蛋白合成现状 | 第25-30页 |
| ·糖肽的连接 | 第26-27页 |
| ·糖蛋白的重塑 | 第27-29页 |
| ·体内干扰tRNA技术 | 第29-30页 |
| ·转谷氨酰胺酶超家族介绍 | 第30-36页 |
| ·蛋白酶 | 第30-32页 |
| ·热力学控制(控制反应平衡)的方法 | 第31页 |
| ·动力学控制的方法 | 第31-32页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶 | 第32-33页 |
| ·N-糖酰胺酶(PNGase)的介绍 | 第33-36页 |
| ·酵母Png1p的酶活特点 | 第33-34页 |
| ·酵母Png1p的结构 | 第34-35页 |
| ·Png1p在体内的作用 | 第35-36页 |
| ·论文的目的和意义 | 第36-38页 |
| 第二章 天然来源的复杂型N-糖苷的分离 | 第38-57页 |
| ·导言:本实验的意义、目的及创新点 | 第38-39页 |
| ·材料与方法 | 第39-44页 |
| ·试验材料 | 第39页 |
| ·试验仪器 | 第39-40页 |
| ·试验方法 | 第40-44页 |
| ·鸡蛋蛋黄中分离复杂型N-糖苷(FSG)和糖肽(SGP)步骤(改进法1) | 第40-41页 |
| ·鸡蛋蛋黄中分离带有复杂型N-糖苷的糖肽(SGP)步骤(改进法2) | 第41-42页 |
| ·糖苷分离方法与检测 | 第42-43页 |
| ·SGP用蛋白酶酶切得到化学法合成糖肽底物 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-57页 |
| ·试验结果 | 第44-54页 |
| ·Sephadex G-50分子筛分离样品 | 第44-45页 |
| ·Sephadex G-25分子筛脱盐纯化 | 第45-46页 |
| ·DEAE-Toyopearl 650 M阴离子交换柱分离SGP和FSG | 第46-47页 |
| ·Sephadex G-25分子筛脱盐纯化 | 第47-49页 |
| ·半制备型HPLC分别纯化SGP和FSG | 第49页 |
| ·Graphic Carbon纯化SGP和FSG | 第49-50页 |
| ·用MALDI-TOF和ESI-MS检测SGP和FSG | 第50-52页 |
| ·半制备型HPLC和Graphic Carbon从N-糖苷中直接分离SGP | 第52-53页 |
| ·SG经ESI-MS检测: | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| 第三章 PNG1逆反应合成糖肽活性测定 | 第57-72页 |
| ·导言:本实验的意义、目的及创新点 | 第57-58页 |
| ·材料与方法 | 第58-65页 |
| ·试验材料 | 第58-60页 |
| ·试验所用质粒和菌株 | 第58页 |
| ·所使用的酶和试剂 | 第58页 |
| ·培养基与溶液 | 第58-60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·试验方法 | 第60-65页 |
| ·E.coli BL21(DE3)表达纯化酵母糖酰胺酶(Png1p) | 第60-62页 |
| ·八肽稳定性的检测 | 第62-63页 |
| ·不同浓度的丙酮对Png1p活性的影响 | 第63页 |
| ·8%丙酮存在的条件下,Png1p在不同时间下的酶活性测定 | 第63页 |
| ·利用来源于酵母的Png1p的逆反应活性体外合成糖肽 | 第63-65页 |
| ·结果与讨论 | 第65-72页 |
| ·试验结果 | 第65-71页 |
| ·来源于酿酒酵母的Png1p诱导表达 | 第65-66页 |
| ·来源于酿酒酵母的Png1纯化 | 第66-67页 |
| ·八肽稳定性检测 | 第67-69页 |
| ·不同浓度的丙酮对Png1p活性的影响 | 第69-70页 |
| ·在8%丙酮存在的条件下,Png1p在不同时间下的酶活测定 | 第70页 |
| ·利用来源于酿酒酵母的Png1p合成糖肽 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| 第四章 来源拟南芥的PNG1P(ATPNG1P)性质表征及应用 | 第72-85页 |
| ·导言:本实验的意义、目的及创新点 | 第72-74页 |
| ·材料与方法 | 第74-78页 |
| ·试验材料 | 第74页 |
| ·试验所用质粒和菌株 | 第74页 |
| ·所使用的酶和试剂 | 第74页 |
| ·培养基与溶液 | 第74页 |
| ·主要仪器 | 第74页 |
| ·试验方法 | 第74-78页 |
| ·在E.coli BL21(DE3)中重组表达与纯化AtPng1p | 第74-76页 |
| ·AtPng1p转谷氨酰胺酶活性检测 | 第76-77页 |
| ·AtPng1p糖酰胺酶活性测定 | 第77页 |
| ·利用AtPng1p转谷氨酰胺酶活性合成糖肽 | 第77-78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-85页 |
| ·试验结果 | 第78-83页 |
| ·AtPng1-pET28a质粒转化到E.coliBL21(DE3) | 第78-79页 |
| ·来源于拟南芥Png1p在E.coli中的重组表达与纯化 | 第79-80页 |
| ·AtPng1p转谷氨酰胺酶活性检测 | 第80-81页 |
| ·AtPng1p糖酰胺酶活性测定 | 第81-82页 |
| ·利用AtPng1p转谷氨酰胺酶活性合成糖肽 | 第82-83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第91-92页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第92页 |
