| 第一部分 Hrpani蛋白纳米药物药效研究 | 第1-63页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-33页 |
| ·植物的防御反应 | 第16-22页 |
| ·病原物识别 | 第16-17页 |
| ·病原识别后的下游反应 | 第17-20页 |
| ·防御反应执行 | 第20-22页 |
| ·植物病原菌Harpins | 第22-26页 |
| ·Harpins的发现 | 第22-23页 |
| ·hrp基因簇 | 第23-24页 |
| ·Harpin蛋白的性质 | 第24页 |
| ·Harpin的作用机制 | 第24-25页 |
| ·Harpin的应用 | 第25-26页 |
| ·纳米药物 | 第26-32页 |
| ·纳米科技 | 第26页 |
| ·纳米生物医学材料 | 第26-27页 |
| ·纳米技术在生物医学材料的应用 | 第27-32页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 第2章 rHrpZ蛋白PLGA纳米颗粒制备与表征 | 第33-43页 |
| ·材料与仪器 | 第33-35页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·主要使用的仪器 | 第33-34页 |
| ·培养基与溶液配制 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·E.coli BL21(pQhrpZ)发酵表达rHrpZ蛋白 | 第35页 |
| ·rHrpZ蛋白纯化及纯度鉴定 | 第35-36页 |
| ·乳化-溶剂蒸发法制备rHrpZ-PLGA NP | 第36页 |
| ·rHrpZ-PLGA NP粒径分布及形貌测定 | 第36-37页 |
| ·蛋白质包封效率及体外释放速率测定 | 第37页 |
| ·试验结果 | 第37-41页 |
| ·rHrpZ蛋白纯度鉴定 | 第37-38页 |
| ·透射电子显微镜分析rHrpZ-PLGA NP形貌 | 第38-39页 |
| ·rHrpZ-PLGA NP颗粒直径分布范围测定 | 第39-40页 |
| ·蛋白质包封效率及体外释放速率 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第3章 rHrpZ-PLGA NP对rHrpZ蛋白生物利用度的影响 | 第43-53页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·供试植株及菌株 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·溶液及培养基 | 第43-44页 |
| ·引物 | 第44页 |
| ·试验方法 | 第44-46页 |
| ·植物HR测定 | 第44-45页 |
| ·PAL活性测定 | 第45页 |
| ·烟草叶片总RNA提取 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR半定量测定烟草叶片中PR-5dB转录水平 | 第46页 |
| ·rHrpZ对茄科雷尔氏菌侵染的保护作用 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-50页 |
| ·HR与给药方式和剂量的关系 | 第46-47页 |
| ·PAL活性变化 | 第47-49页 |
| ·PR5-dB基因转录水平变化 | 第49-50页 |
| ·rHrpZ-PLGA NP对茄科雷尔氏菌攻击的保护效果 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 参考文献 | 第53-63页 |
| 第二部分 Pen-2纳米DNA药物抗WSSV研究 | 第63-125页 |
| 中文摘要 | 第63-65页 |
| Abstract | 第65-67页 |
| 引言 | 第67-68页 |
| 第1章 文献综述 | 第68-81页 |
| ·WSSV研究进展 | 第68-75页 |
| ·WSSV形态结构 | 第68页 |
| ·WSSV蛋白质研究 | 第68-70页 |
| ·WSSV感染宿主与实验动物模型 | 第70页 |
| ·WSSV的传播途径 | 第70页 |
| ·WSSV防治 | 第70-73页 |
| ·WSSV与虾免疫系统的关系 | 第73-75页 |
| ·对虾抗菌肽penaeidin | 第75-80页 |
| ·抗菌肽概述 | 第75-78页 |
| ·对虾抗菌肽penaeidins研究进展 | 第78-80页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第80-81页 |
| 第2章 对虾病原微生物提取与鉴定 | 第81-88页 |
| ·材料与试剂 | 第81-82页 |
| ·试剂及实验材料 | 第81页 |
| ·实验动物 | 第81页 |
| ·引物 | 第81页 |
| ·溶液和培养基配制 | 第81-82页 |
| ·试验方法 | 第82-84页 |
| ·WSSV提取及病毒滴定 | 第82页 |
| ·弧菌的分离与鉴定 | 第82-84页 |
| ·结果 | 第84-86页 |
| ·WSSV病毒提取 | 第84页 |
| ·弧菌分离 | 第84-85页 |
| ·弧菌生化指标鉴定 | 第85-86页 |
| ·PCR鉴定可疑副溶血弧菌 | 第86页 |
| ·溶藻弧菌毒性测定 | 第86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| 第3章 Pen-2在原核系统中的表达、纯化、酶切及对WSSV的作用 | 第88-95页 |
| ·材料 | 第88-90页 |
| ·菌株及病毒 | 第88页 |
| ·试剂 | 第88页 |
| ·培养基 | 第88-89页 |
| ·溶液配制 | 第89-90页 |
| ·试验方法 | 第90-92页 |
| ·Pen-2融合蛋白表达 | 第90页 |
| ·Pen-2融合蛋白纯化 | 第90-91页 |
| ·Pen-2融合蛋白肠激酶切 | 第91页 |
| ·15%SDS-PAGE配制 | 第91页 |
| ·蛋白质凝胶染色 | 第91-92页 |
| ·Pen-2对WSSV作用 | 第92页 |
| ·结果 | 第92-93页 |
| ·Pen-2融合蛋白表达、纯化及肠激酶切 | 第92-93页 |
| ·重组Pen-2对WSSV的体外灭活作用 | 第93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| 第4章 Pen-2真核表达载体及其纳米药物抗WSSV、弧菌作用 | 第95-115页 |
| ·材料和试剂 | 第95-97页 |
| ·试剂 | 第95页 |
| ·溶液配制 | 第95-97页 |
| ·引物 | 第97页 |
| ·试验方法 | 第97-103页 |
| ·pcDNA3.1(-)-SP质粒大量提取 | 第97-98页 |
| ·质粒-壳聚糖纳米颗粒制备及质粒DNA吸附效率测定 | 第98页 |
| ·SP-CS NP粒径及形貌测定 | 第98-99页 |
| ·克氏原鳌虾质粒DNA给药及WSSV攻击保护试验 | 第99页 |
| ·虾总RNA及cDNA第一链合成 | 第99-100页 |
| ·RT-PCR检测血淋巴中Pen-2和Swssvgp514转录 | 第100页 |
| ·抗体纯化 | 第100页 |
| ·16.5%Tris-Tricine SDS-PAGE配制 | 第100-101页 |
| ·Western Blot检验克氏原鳌虾血淋巴中Pen-2表达 | 第101-102页 |
| ·虾防御性酶活性测定 | 第102页 |
| ·Pen-2对溶藻弧菌的清除效果 | 第102-103页 |
| ·结果 | 第103-110页 |
| ·壳聚糖对质粒DNA的吸附效果 | 第103页 |
| ·扫描电子显微镜测定DNA-壳聚糖纳米颗粒形貌和直径 | 第103-104页 |
| ·RT-PCR测定Pen-2在克氏原鳌虾体内的转录 | 第104-105页 |
| ·抗体纯化 | 第105-106页 |
| ·Western blot检测Pen-2蛋白在克氏原鳌虾血淋巴中的表达 | 第106-107页 |
| ·克氏原鳌虾防御性酶类测定 | 第107页 |
| ·体内表达的Pen-2对WSSV攻击的保护效果 | 第107-108页 |
| ·幸存鳌虾血淋巴中Swssvgp514转录水平检测 | 第108-109页 |
| ·Pen-2对溶藻弧菌的清除作用 | 第109-110页 |
| ·讨论 | 第110-115页 |
| 参考文献 | 第115-125页 |
| 附录 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
