| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 缩写 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-25页 |
| ·引言 | 第14页 |
| ·UDP-GlcNAc合成的研究进展 | 第14-18页 |
| ·UDP-GlcNAc在生物体中的合成 | 第14-17页 |
| ·细菌体中的合成 | 第15-16页 |
| ·在真核细胞中的合成 | 第16-17页 |
| ·UDP-GlcNAc的应用价值 | 第17页 |
| ·UDP-GlcNAc的合成方法 | 第17-18页 |
| ·无细胞体系重建代谢途径研究进展 | 第18-23页 |
| ·无细胞体系的基本原理 | 第19-20页 |
| ·无细胞体系的优越性 | 第20-21页 |
| ·无细胞体系重建代谢途径 | 第21-23页 |
| ·本研究的基本思路与拟研究内容 | 第23-25页 |
| ·基于体内表达体系合成UDP-GlcNAc | 第23-24页 |
| ·无细胞表达体系合成UDP-GlcNAc | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-33页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第25-27页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器与设备 | 第26-27页 |
| ·分子生物学相关操作 | 第27-29页 |
| ·枯草芽孢杆菌、大肠杆菌基因组的提取 | 第27页 |
| ·酵母基因组的提取 | 第27-28页 |
| ·凝胶回收纯化DNA | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞 | 第28页 |
| ·质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·培养基及培养方法 | 第29页 |
| ·大肠杆菌无细胞反应体系 | 第29-30页 |
| ·分析测定方法 | 第30-33页 |
| ·细胞密度的测定 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第30页 |
| ·Western-blotting | 第30-31页 |
| ·YqgR酶活的测定 | 第31-32页 |
| ·UDP-GlcNAc含量的测定 | 第32-33页 |
| 第三章 基于体内表达体系的UDP-N-乙酰葡糖胺的合成 | 第33-53页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-39页 |
| ·菌株与质粒 | 第33-35页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第35页 |
| ·培养基与培养条件 | 第35页 |
| ·分子生物学基本操作 | 第35页 |
| ·载体的构建 | 第35-37页 |
| ·yqgR、agm1、glmU基因的获得 | 第35页 |
| ·克隆载体的构建 | 第35-36页 |
| ·表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·YqgR、Agm1、GlmU酶蛋白的表达 | 第37-38页 |
| ·蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·亲和层析纯化目标蛋白 | 第38-39页 |
| ·透析 | 第39页 |
| ·酶活的检测 | 第39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-52页 |
| ·基因组的提取及yqgR、agm1、glmU基因的扩增 | 第39-41页 |
| ·克隆载体的构建 | 第41页 |
| ·表达载体和重组菌株的构建 | 第41-42页 |
| ·YqgR、Agm1和GlmU在大肠杆菌中的表达 | 第42-43页 |
| ·Agm1表达条件的优化 | 第43-47页 |
| ·诱导温度对Agm1表达的影响 | 第43-45页 |
| ·诱导后培养时间对Agm1表达的影响 | 第45页 |
| ·IPTG浓度对Agm1表达的影响 | 第45页 |
| ·Mg~(2+)浓度对Agm1表达的影响 | 第45-46页 |
| ·用Rosetta-gami表达Agm1 | 第46-47页 |
| ·YqgR、Agm1和GlmU蛋白的纯化 | 第47-49页 |
| ·UDP-GlcNAc的合成 | 第49-52页 |
| ·YqgR的GlcNAc激酶活性 | 第50页 |
| ·UDP-GlcNAc合成体系的优化 | 第50-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第四章 基于无细胞体系的UDP-N-乙酰葡糖胺的合成 | 第53-67页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·材料与方法 | 第53-57页 |
| ·菌株与质粒 | 第53-55页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第55页 |
| ·培养基与培养条件 | 第55页 |
| ·分子生物学基本操作 | 第55页 |
| ·载体的构建 | 第55-56页 |
| ·yqgR、agm1、glmU基因的获得 | 第55-56页 |
| ·克隆载体的构建 | 第56页 |
| ·表达载体的构建 | 第56页 |
| ·YqgR、Agm1、GlmU酶蛋白的表达 | 第56页 |
| ·蛋白的检测 | 第56页 |
| ·酶活的检测 | 第56-57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-66页 |
| ·yqgR、agm1、glmU基因的扩增 | 第57-59页 |
| ·克隆载体的构建 | 第59-60页 |
| ·表达载体的构建 | 第60页 |
| ·YqgR、Agm1和GlmU在无细胞体系中的表达 | 第60-62页 |
| ·Agm1表达条件的优化 | 第62-63页 |
| ·YqgR活性的测定 | 第63-64页 |
| ·UDP-GlcNAc的三酶合成 | 第64页 |
| ·UDP-GlcNAc合成途径在无细胞体系的重建 | 第64-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第七章 结论与展望 | 第67-70页 |
| ·结论 | 第67-68页 |
| ·课题展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 作者简历 | 第78页 |
