| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第7-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-31页 |
| 1.1 OTA的研究进展 | 第13-22页 |
| 1.1.1 OTA的结构及其理化性质 | 第13页 |
| 1.1.2 OTA的主要产生菌及其污染分布 | 第13-14页 |
| 1.1.3 OTA的毒性作用及限量标准 | 第14-16页 |
| 1.1.4 OTA的防控技术 | 第16-18页 |
| 1.1.5 OTA的检测方法 | 第18-22页 |
| 1.2 纳米抗体的研究进展 | 第22-29页 |
| 1.2.1 纳米抗体的结构特点 | 第23-24页 |
| 1.2.2 纳米抗体的理化与生物学特性 | 第24-25页 |
| 1.2.3 纳米抗体的制备技术 | 第25-27页 |
| 1.2.4 纳米抗体的应用及前景展望 | 第27-29页 |
| 1.3 主要研究内容和意义 | 第29-31页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第29-30页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第30-31页 |
| 第2章 OTA Nb噬菌体展示文库的构建、淘选、鉴定及应用研究 | 第31-60页 |
| 2.1 材料、仪器与试剂 | 第31-33页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第31-32页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第32页 |
| 2.1.3 生化试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.4 主要溶液和培养基 | 第33页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第33-43页 |
| 2.2.1 羊驼免疫和抗血清的监测 | 第33-34页 |
| 2.2.2 白细胞的分离和总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.3 cDNA的合成和VHH基因的扩增 | 第35-37页 |
| 2.2.4 文库的构建和鉴定 | 第37-39页 |
| 2.2.5 噬菌体展示纳米抗体文库的淘选与鉴定 | 第39-41页 |
| 2.2.6 噬菌体荧光定量免疫PCR（噬菌体RT-IPCR） | 第41-43页 |
| 2.3 实验结果 | 第43-56页 |
| 2.3.1 羊驼抗血清的鉴定 | 第43-44页 |
| 2.3.2 总RNA的质量评价 | 第44-45页 |
| 2.3.3 VHH基因的扩增 | 第45页 |
| 2.3.4 初始文库的鉴定 | 第45-47页 |
| 2.3.5 OTA纳米抗体噬菌体克隆的淘选与鉴定 | 第47-51页 |
| 2.3.6 超灵敏检测OTA的噬菌体RT-IPCR | 第51-56页 |
| 2.4 讨论 | 第56-59页 |
| 2.4.1 文库淘选 | 第56-57页 |
| 2.4.2 噬菌体RT-IPCR | 第57-59页 |
| 2.5 小结 | 第59-60页 |
| 第3章 OTA Nb的原核表达、活性分析及应用研究 | 第60-86页 |
| 3.1 材料、仪器与试剂 | 第60-62页 |
| 3.1.1 主要材料 | 第60页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第60-61页 |
| 3.1.3 生化试剂 | 第61页 |
| 3.1.4 主要溶液和培养基 | 第61-62页 |
| 3.2 方法与步骤 | 第62-69页 |
| 3.2.1 化学转化感受态细胞的制备 | 第62页 |
| 3.2.2 Nb原核表达载体的构建 | 第62-64页 |
| 3.2.3 Nb的表达、纯化及鉴定 | 第64-65页 |
| 3.2.4 Nb的活性分析 | 第65-67页 |
| 3.2.5 OTA Nb同源建模和分子对接分析 | 第67页 |
| 3.2.6 建立基于纳米抗体Nb28检测谷物中OTA的Nb-ELISA | 第67-69页 |
| 3.3 实验结果 | 第69-82页 |
| 3.3.1 原核表达载体pET25b-VHH的构建 | 第69-70页 |
| 3.3.2 Nb的诱导表达、纯化及鉴定 | 第70-71页 |
| 3.3.3 Nb的活性分析 | 第71-74页 |
| 3.3.4 同源建模和分子对接分析 | 第74-76页 |
| 3.3.5 建立基于纳米抗体Nb28检测谷物中OTA的Nb-ELISA | 第76-82页 |
| 3.4 讨论 | 第82-84页 |
| 3.4.1 纳米抗体的表达 | 第82-83页 |
| 3.4.2 纳米抗体的结构与功能关系 | 第83-84页 |
| 3.5 小结 | 第84-86页 |
| 第4章 OTA纳米抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的原核表达、活性分析及应用研究 | 第86-109页 |
| 4.1 材料、仪器与试剂 | 第86-88页 |
| 4.1.1 主要材料 | 第86页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第86-87页 |
| 4.1.3 生化试剂 | 第87页 |
| 4.1.4 主要溶液和培养基 | 第87-88页 |
| 4.2 方法与步骤 | 第88-96页 |
| 4.2.1 表达载体pecan 45-Nb28-AP的构建 | 第88-90页 |
| 4.2.2 Nb28-AP融合蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第90-91页 |
| 4.2.3 Nb28-AP融合蛋白的活性分析 | 第91-93页 |
| 4.2.4 基于Nb28-AP融合蛋白检测谷物中OTA荧光酶免疫分析法的建立 | 第93-96页 |
| 4.3 实验结果 | 第96-106页 |
| 4.3.1 表达载体pecan45-Nb28-AP的构建 | 第96-97页 |
| 4.3.2 Nb28-AP融合蛋白的诱导表达、纯化及鉴定 | 第97页 |
| 4.3.3 Nb28-AP中碱性磷酸酶的活性分析 | 第97-99页 |
| 4.3.4 基于Nb28-AP融合蛋白建立检测谷物中OTA的FEIA | 第99-106页 |
| 4.4 讨论 | 第106-108页 |
| 4.4.1 酶标抗体的生物制备 | 第106-107页 |
| 4.4.2 生物合成酶标抗体的检测性能分析 | 第107-108页 |
| 4.5 小结 | 第108-109页 |
| 第5章 结论与展望 | 第109-112页 |
| 5.1 结论 | 第109-110页 |
| 5.1.1 Nb噬菌体展示文库的构建、淘选、鉴定及应用研究 | 第109页 |
| 5.1.2 OTA纳米抗体的原核表达、活性分析及应用研究 | 第109-110页 |
| 5.1.3 Nb-AP融合蛋白的原核表达、活性分析及应用研究 | 第110页 |
| 5.2 展望 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-128页 |
| 附录A 氨基酸基本信息表 | 第128-129页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第129-130页 |
| 个人简介 | 第130页 |
