| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-20页 |
| 1. 酸性橙Ⅱ概述 | 第13-15页 |
| 1.1 合成色素与酸性橙Ⅱ | 第13-14页 |
| 1.2 酸性橙Ⅱ的理化性质 | 第14页 |
| 1.3 酸性橙Ⅱ的应用及其毒性 | 第14-15页 |
| 2 酸性橙Ⅱ检测方法研究进展 | 第15-19页 |
| 2.1 色谱分析法 | 第15-17页 |
| 2.1.1 薄层色谱法 | 第15页 |
| 2.1.2 高效液相色谱法 | 第15-16页 |
| 2.1.3 反相高效液相色谱法 | 第16页 |
| 2.1.4 超高效液相色谱法 | 第16-17页 |
| 2.1.5 高效液相色谱—串联质谱法 | 第17页 |
| 2.2. 荧光光谱法 | 第17页 |
| 2.3 电化学分析法 | 第17-18页 |
| 2.3.1 表面增强拉曼光谱技术 | 第17-18页 |
| 2.3.2 极谱法 | 第18页 |
| 2.4 酶联免疫吸附检测法 | 第18-19页 |
| 3 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 酸性橙Ⅱ人工抗原的制备与鉴定 | 第20-30页 |
| 1 材料和方法 | 第20-25页 |
| 1.1 主要试剂 | 第20页 |
| 1.2 仪器、材料与实验动物 | 第20页 |
| 1.3 主要溶液系统 | 第20-21页 |
| 1.4 酸性橙Ⅱ人工抗原的制备 | 第21-23页 |
| 1.4.1 透析袋处理 | 第21页 |
| 1.4.2 完全抗原A的制备 | 第21-22页 |
| 1.4.2.1 免疫原A合成 | 第21-22页 |
| 1.4.2.2 包被原A的合成 | 第22页 |
| 1.4.3 完全抗原B的制备 | 第22-23页 |
| 1.4.3.1 免疫原B合成 | 第22-23页 |
| 1.4.3.2 包被原B合成 | 第23页 |
| 1.5 人工抗原的分析 | 第23-25页 |
| 1.5.1 人工抗原蛋白质浓度的测定 | 第23-24页 |
| 1.5.2 人工抗原紫外光谱扫描法鉴定 | 第24页 |
| 1.5.3 人工抗原SDS-PAGE凝胶电泳鉴定 | 第24页 |
| 1.5.4 人工抗原的免疫学鉴定 | 第24-25页 |
| 2 结果 | 第25-27页 |
| 2.1 人工抗原蛋白浓度的测定 | 第25页 |
| 2.2 人工抗原的紫外光谱扫描结果 | 第25-26页 |
| 2.2.1 完全抗原A的紫外光谱 | 第25-26页 |
| 2.2.2 完全抗原B的紫外光谱 | 第26页 |
| 2.3 人工抗原SDS-PAGE凝胶电泳鉴定结果 | 第26-27页 |
| 2.4 人工抗原免疫学鉴定结果 | 第27页 |
| 3 讨论 | 第27-30页 |
| 第三章 酸性橙Ⅱ单克隆抗体的制备及鉴定 | 第30-41页 |
| 1 材料和方法 | 第30-36页 |
| 1.1 实验动物与生物材料 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 1.3 实验仪器与耗材 | 第30-31页 |
| 1.4 主要溶液系统 | 第31-32页 |
| 1.4.1 ELISA溶液 | 第31页 |
| 1.4.2 细胞培养溶液 | 第31-32页 |
| 1.4.3 蛋白纯化使用液 | 第32页 |
| 1.5 酸性橙Ⅱ单克隆抗体的制备 | 第32-35页 |
| 1.5.1 ELISA筛选系统的建立 | 第32-33页 |
| 1.5.1.1 iELISA操作程序 | 第32页 |
| 1.5.1.2 CiELISA操作程序 | 第32-33页 |
| 1.5.1.3 确定包被抗原工作浓度和阳性血清效价 | 第33页 |
| 1.5.2 细胞融合与培养 | 第33-34页 |
| 1.5.2.1 骨髓瘤细胞的培养 | 第33页 |
| 1.5.2.2 饲养细胞的制备 | 第33-34页 |
| 1.5.2.3 免疫脾细胞的制备 | 第34页 |
| 1.5.2.4 细胞融合 | 第34页 |
| 1.5.2.5 阳性孔的筛选 | 第34页 |
| 1.5.2.6 阳性孔的亚克隆 | 第34页 |
| 1.5.3 杂交瘤细胞株的稳定性试验及建株 | 第34页 |
| 1.5.4 腹水制备 | 第34-35页 |
| 1.5.5 腹水纯化 | 第35页 |
| 1.6 单克隆抗体的鉴定 | 第35-36页 |
| 1.6.1 纯化前后腹水蛋白浓度测定 | 第35页 |
| 1.6.2 单克隆抗体特异性鉴定 | 第35-36页 |
| 2 结果 | 第36-39页 |
| 2.1 包被抗原的工作浓度和阳性血清效价的确定 | 第36页 |
| 2.2 融合前SP2/0的生长状态 | 第36页 |
| 2.3 单克隆孔杂交瘤细胞生长状态 | 第36-37页 |
| 2.4 单克隆抗体细胞株的建立和稳定性 | 第37页 |
| 2.5 腹水的制备 | 第37页 |
| 2.6 单克隆抗体的鉴定 | 第37-39页 |
| 2.6.1 腹水蛋白含量测定 | 第37-38页 |
| 2.6.2 SDS-PAGE检测腹水纯化效果 | 第38-39页 |
| 2.6.3 抗体特异性鉴定 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 建立检测卤肉中添加酸性橙Ⅱ的ELISA方法 | 第41-48页 |
| 1 材料和方法 | 第41-42页 |
| 1.1 实验仪器与试剂 | 第41页 |
| 1.2 样品 | 第41页 |
| 1.3 ELSIA检测方法的建立 | 第41-42页 |
| 1.3.1 确定最佳封闭条件 | 第41页 |
| 1.3.2 抗原抗体最佳工作浓度的确定 | 第41页 |
| 1.3.3 CiELISA标准工作曲线及相关参数 | 第41-42页 |
| 1.4 样品添加回收试验 | 第42页 |
| 1.4.1 样品处理方法 | 第42页 |
| 1.4.2 样品基质干扰 | 第42页 |
| 1.4.3 标准曲线的绘制 | 第42页 |
| 1.4.4 样品中酸性橙Ⅱ回收率测定 | 第42页 |
| 2 结果 | 第42-47页 |
| 2.1 ELSIA检测方法的建立 | 第42-45页 |
| 2.1.1 最佳封闭条件的确定 | 第42-43页 |
| 2.1.2 抗原抗体工作浓度的确定 | 第43页 |
| 2.1.3 CiELISA标准工作曲线及参数 | 第43-45页 |
| 2.2 酸性橙Ⅱ单克隆抗体的初步应用 | 第45-47页 |
| 2.2.1 样品基质干扰 | 第45-46页 |
| 2.2.2 样品溶液中标准曲线的绘制 | 第46-47页 |
| 2.3 样品添加回收率测定 | 第47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 全文结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |