| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第14-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-26页 |
| 1 头孢氨苄概述 | 第16-19页 |
| 1.1 头孢氨苄的理化性质 | 第16-17页 |
| 1.2 头孢氨苄的来源及应用 | 第17页 |
| 1.3 头孢氨苄的主要危害 | 第17-19页 |
| 1.3.1 细菌耐药性增强 | 第17-18页 |
| 1.3.2 肾毒性 | 第18页 |
| 1.3.3 变态反应 | 第18页 |
| 1.3.4 肠道菌群失衡 | 第18页 |
| 1.3.5 致畸致癌致突变 | 第18页 |
| 1.3.6 生态毒性 | 第18-19页 |
| 1.4 头孢氨苄的体内代谢及残留限量 | 第19页 |
| 2 头孢氨苄检测方法研究进展 | 第19-24页 |
| 2.1 微生物检测法 | 第19-20页 |
| 2.1.1 TTC法 | 第19-20页 |
| 2.1.2 试管扩散法 | 第20页 |
| 2.2 仪器检测法 | 第20-23页 |
| 2.2.1 紫外-可见分光光度法 | 第20-21页 |
| 2.2.2 近红外光谱法 | 第21页 |
| 2.2.3 旋光法 | 第21页 |
| 2.2.4 高效液相色谱法 | 第21-22页 |
| 2.2.5 液相色谱-质谱联用法 | 第22页 |
| 2.2.6 毛细管电泳法 | 第22-23页 |
| 2.2.7 其他仪器检测法 | 第23页 |
| 2.3 免疫学检测法 | 第23-24页 |
| 2.3.1 酶联免疫吸附 | 第23页 |
| 2.3.2 荧光偏振免疫 | 第23页 |
| 2.3.3 免疫层析法 | 第23-24页 |
| 2.3.4 蛋白芯片法 | 第24页 |
| 3 研究目的、意义及技术路线 | 第24-26页 |
| 第二章 头孢氨苄人工抗原的合成与鉴定 | 第26-33页 |
| 1 材料与方法 | 第26-29页 |
| 1.1 实验动物 | 第26页 |
| 1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 1.4 主要溶液系统 | 第26-27页 |
| 1.4.1 ELISA使用液 | 第26-27页 |
| 1.4.2 电泳使用液 | 第27页 |
| 1.5 头孢氨苄人工抗原的合成 | 第27-28页 |
| 1.5.1 透析袋预处理 | 第27页 |
| 1.5.2 免疫原合成 | 第27-28页 |
| 1.5.3 包被原合成 | 第28页 |
| 1.6 人工抗原的分析与鉴定 | 第28-29页 |
| 1.6.1 蛋白浓度测定 | 第28页 |
| 1.6.2 紫外扫描鉴定 | 第28页 |
| 1.6.3 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定 | 第28-29页 |
| 1.6.4 免疫学方法鉴定 | 第29页 |
| 2 结果 | 第29-31页 |
| 2.1 蛋白浓度测定结果 | 第29页 |
| 2.2 紫外分光光度法鉴定结果 | 第29-30页 |
| 2.3 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定结果 | 第30页 |
| 2.4 免疫学方法鉴定结果 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 头孢氨苄单克隆抗体的研制与鉴定 | 第33-46页 |
| 1 材料和方法 | 第33-39页 |
| 1.1 实验动物与生物材料 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 1.3 实验仪器与耗材 | 第33页 |
| 1.4 主要溶液系统 | 第33-34页 |
| 1.4.1 ELISA使用液 | 第33页 |
| 1.4.2 电泳使用液 | 第33-34页 |
| 1.4.3 细胞培养用液 | 第34页 |
| 1.4.4 亲和层析柱使用液 | 第34页 |
| 1.5 头孢氨苄单克隆抗体的研制 | 第34-38页 |
| 1.5.1 实验动物免疫程序 | 第34-35页 |
| 1.5.2 ELISA筛选方法的建立 | 第35-36页 |
| 1.5.3 细胞融合与培养 | 第36-38页 |
| 1.5.4 杂交瘤细胞株稳定性测试及建株 | 第38页 |
| 1.5.5 单克隆抗体大量制备 | 第38页 |
| 1.5.6 单克隆抗体纯化 | 第38页 |
| 1.6 单克隆抗体的分析与鉴定 | 第38-39页 |
| 1.6.1 单克隆抗体蛋白浓度及纯化回收率测定 | 第38-39页 |
| 1.6.2 抗体纯化效果鉴定 | 第39页 |
| 1.6.3 单克隆抗体效价测定 | 第39页 |
| 1.6.4 单克隆抗体亚型鉴定 | 第39页 |
| 1.6.5 单克隆抗体亲和力鉴定 | 第39页 |
| 1.6.6 单克隆抗体特异性鉴定 | 第39页 |
| 2 结果 | 第39-44页 |
| 2.1 包被抗原最佳工作浓度和血清抗体效价的确定 | 第39-40页 |
| 2.2 小鼠骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞状态 | 第40页 |
| 2.3 单克隆抗体细胞株的建立和稳定性 | 第40-41页 |
| 2.4 单克隆抗体的分析与鉴定 | 第41-44页 |
| 2.4.1 单克隆抗体蛋白浓度及纯化回收率测定 | 第41页 |
| 2.4.2 单克隆抗体蛋白纯化效果鉴定 | 第41-42页 |
| 2.4.3 单克隆抗体纯化前、后效价测定 | 第42页 |
| 2.4.4 单克隆抗体亚型鉴定 | 第42-43页 |
| 2.4.5 单克隆抗体亲和力鉴定 | 第43页 |
| 2.4.6 单克隆抗体特异性鉴定 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 鲜奶中头孢氨苄ELISA检测方法的建立 | 第46-52页 |
| 1 材料和方法 | 第46-47页 |
| 1.1 实验样品 | 第46页 |
| 1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 1.3 主要仪器 | 第46页 |
| 1.4 ELISA使用液 | 第46页 |
| 1.5 ELISA检测方法的建立 | 第46-47页 |
| 1.5.1 最佳封闭液的确定 | 第46页 |
| 1.5.2 抗原抗体最佳工作浓度的确定 | 第46页 |
| 1.5.3 间接竞争ELISA标准曲线及相关参数的确定 | 第46-47页 |
| 1.6 样品添加回收实验 | 第47页 |
| 1.6.1 样品前处理方法 | 第47页 |
| 1.6.2 样品基质干扰 | 第47页 |
| 1.6.3 标准曲线的绘制 | 第47页 |
| 1.6.4 样品添加回收率测定 | 第47页 |
| 2 结果 | 第47-51页 |
| 2.1 ELISA检测方法的建立 | 第47-50页 |
| 2.1.1 最佳封闭条件的确定 | 第47-48页 |
| 2.1.2 最佳抗原抗体工作浓度的确定 | 第48页 |
| 2.1.3 间接竞争ELISA标准曲线及相关参数 | 第48-50页 |
| 2.2 头孢氨苄单克隆抗体的初步应用 | 第50-51页 |
| 2.2.1 样品基质干扰 | 第50页 |
| 2.2.2 样品溶液标准抑制曲线的绘制 | 第50-51页 |
| 2.3 样品添加回收率的测定 | 第51页 |
| 3 讨论 | 第51-52页 |
| 第五章 头孢氨苄胶体金免疫层析试纸条的研制 | 第52-63页 |
| 1 材料和方法 | 第52-57页 |
| 1.1 主要试剂 | 第52页 |
| 1.2 主要仪器 | 第52页 |
| 1.3 主要溶液系统 | 第52-53页 |
| 1.4 胶体金的制备与鉴定 | 第53页 |
| 1.4.1 器皿的清洁 | 第53页 |
| 1.4.2 胶体金的制备 | 第53页 |
| 1.4.3 胶体金鉴定 | 第53页 |
| 1.5 金标抗体的制备与纯化 | 第53-55页 |
| 1.5.1 单克隆抗体前处理 | 第53页 |
| 1.5.2 最佳pH值的确定 | 第53-54页 |
| 1.5.3 最佳单抗标记量的确定 | 第54页 |
| 1.5.4 抗体的胶体金标记与纯化 | 第54-55页 |
| 1.6 试纸条的制备 | 第55页 |
| 1.6.1 金标垫的制备 | 第55页 |
| 1.6.2 NC膜包被抗原和二抗 | 第55页 |
| 1.7 试纸条的组装 | 第55-56页 |
| 1.8 试纸条的使用及结果判定 | 第56页 |
| 1.9 试纸条灵敏性、特异性和稳定性实验 | 第56-57页 |
| 1.9.1 灵敏度实验 | 第56页 |
| 1.9.2 特异性实验 | 第56页 |
| 1.9.3 稳定性实验 | 第56-57页 |
| 2 结果 | 第57-61页 |
| 2.1 胶体金的鉴定 | 第57-58页 |
| 2.1.1 胶体金溶液的直观检测 | 第57页 |
| 2.1.2 胶体金紫外分光光度法鉴定 | 第57-58页 |
| 2.2 金标抗体的制备 | 第58-59页 |
| 2.2.1 金标抗体最适pH值的确定 | 第58页 |
| 2.2.2 金标抗体最佳单抗标记量 | 第58-59页 |
| 2.3 金标垫的制备 | 第59页 |
| 2.4 NC膜包被抗原和抗体的确定 | 第59-60页 |
| 2.4.1 NC膜C线的确定 | 第59页 |
| 2.4.2 NC膜T线的确定 | 第59-60页 |
| 2.4.3 NC膜封闭液的确定 | 第60页 |
| 2.5 试纸条性能鉴定 | 第60-61页 |
| 2.5.1 试纸条灵敏度鉴定 | 第60页 |
| 2.5.2 试纸条特异性鉴定 | 第60-61页 |
| 2.5.3 试纸条稳定性鉴定 | 第61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 全文结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第73-74页 |