| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-16页 |
| 文中常用缩写列表 | 第16-19页 |
| 第一章 A-1 型短指(趾)症及Hedgehog 信号通路研究综述 | 第19-62页 |
| 第一节 A-1 型短指(趾)症简介 | 第19-24页 |
| ·A1 型短指/趾症的发现及短指/趾症的表型分类 | 第19-21页 |
| ·A1 型短指/趾症的家系分析 | 第21-24页 |
| 第二节 IHH 基因与A-1 型短指(趾)症 | 第24-28页 |
| 第三节 Hedgehog 信号通路的研究进展 | 第28-58页 |
| ·Hedgehog基因家族 | 第28-30页 |
| ·Hedgehog蛋白的表达、加工与修饰 | 第30-34页 |
| ·Hedgehog蛋白的分泌与运输 | 第34-49页 |
| ·Hedgehog蛋白与受体的结合及下游信号的激活 | 第49-58页 |
| 第四节 IHH 与骨骼发育 | 第58-62页 |
| ·骨骼发育概述 | 第58-59页 |
| ·IHH 与骨骼发育的关系 | 第59-62页 |
| 第二章 A1型短指(趾)症致病基因IHH的分子致病机理研究 | 第62-143页 |
| 第一节 研究目标与研究策略 | 第62-63页 |
| 第二节 材料与方法 | 第63-98页 |
| ·材料 | 第63-69页 |
| ·细菌菌株及质粒 | 第63页 |
| ·真核细胞 | 第63页 |
| ·常见的生物化学品 | 第63-65页 |
| ·基因操作相关试剂 | 第65页 |
| ·细胞操作相关试剂 | 第65页 |
| ·蛋白操作相关试剂 | 第65-66页 |
| ·主要试剂的配制 | 第66页 |
| ·主要耗材及仪器 | 第66页 |
| ·引物 | 第66-69页 |
| ·方法 | 第69-98页 |
| ·小量质粒的提取 | 第69-71页 |
| ·PCR | 第71页 |
| ·DNA sequencing (测序) | 第71-72页 |
| ·Agarose electrophoresis (琼脂糖电泳) | 第72页 |
| ·DNA extraction from agarose gel (琼脂糖胶中回收DNA) | 第72页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第72-73页 |
| ·连接产物的转化 | 第73-74页 |
| ·基因的原核表达和纯化 | 第74-76页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第76-78页 |
| ·基因的真核表达和鉴定 | 第78-83页 |
| ·真核细胞的培养与稳定表达克隆的筛选 | 第83-85页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第85-86页 |
| ·Ihh 蛋白诱导的碱性磷酸酶活性检测 | 第86-87页 |
| ·Ihh 蛋白与heparin 的结合试验 | 第87-88页 |
| ·Ihh 蛋白的多聚体试验 | 第88-90页 |
| ·配体Ihh 蛋白与受体Patched 蛋白的结合试验 | 第90-98页 |
| 第三节 实验结果与分析 | 第98-126页 |
| ·突变型蛋白和野生型蛋白在表达加工方面的差异 | 第98-104页 |
| ·突变集中的八个氨基酸区域对 Ihh 蛋白稳定性的影响 | 第104-107页 |
| ·突变型 Ihh 蛋白和野生型 Ihh 蛋白与 HSPGs 结合的差异 | 第107-109页 |
| ·突变型 Ihh 蛋白和野生型 Ihh 蛋白在多聚体形成方面的差异 | 第109-110页 |
| ·突变型 IhhN 蛋白和野生型 IhhN 蛋白的原核表达 | 第110-114页 |
| ·原核表达的突变型 Ihh 蛋白和野生型 Ihh 蛋白的细胞诱导实验 | 第114-115页 |
| ·突变型 Ihh 蛋白和野生型 Ihh 蛋白与受体 Ptc 蛋白的结合实验 | 第115-123页 |
| ·IhhN 蛋白的羧基端保守区域在多聚体形成和自裂解过程中的作用 | 第123-126页 |
| 第四节 讨论 | 第126-139页 |
| ·E95K 和 D100E 突变型蛋白的稳定性和温度敏感性 | 第126-131页 |
| ·突变型蛋白的脂修饰和细胞定位 | 第131-132页 |
| ·E95K 突变型蛋白与 HSPGs 的结合增强 | 第132-134页 |
| ·突变型蛋白的多聚体形成 | 第134-135页 |
| ·突变型蛋白与受体 Patched 蛋白结合减弱 | 第135-138页 |
| ·IhhN 蛋白的羧基端保守区域的功能 | 第138-139页 |
| 第五节 总结与展望 | 第139-143页 |
| 参考文献 | 第143-161页 |
| 致谢 | 第161-163页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文目录 | 第163-164页 |
