| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 绪论 | 第8-16页 |
| 1.1 功能性低聚糖概述 | 第8页 |
| 1.2 低聚乳果糖概述 | 第8-11页 |
| 1.2.1 低聚乳果糖的结构及理化性质 | 第8-9页 |
| 1.2.2 低聚乳果糖的生理功能 | 第9-10页 |
| 1.2.3 低聚乳果糖在食品中的应用 | 第10页 |
| 1.2.4 低聚乳果糖的制备 | 第10-11页 |
| 1.3 果聚糖蔗糖酶概述 | 第11-14页 |
| 1.3.1 果聚糖蔗糖酶的表达 | 第11-12页 |
| 1.3.2 果聚糖蔗糖酶的性质 | 第12页 |
| 1.3.3 果聚糖蔗糖酶的应用 | 第12-14页 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第14-15页 |
| 1.4.1 食品级表达系统 | 第14页 |
| 1.4.2 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第14-15页 |
| 1.5 本课题的研究背景及意义 | 第15页 |
| 1.6 本课题研究的主要内容 | 第15-16页 |
| 2 实验材料与方法 | 第16-24页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 培养基与试剂的配制 | 第17-19页 |
| 2.2.1 微生物培养基 | 第17页 |
| 2.2.2 相关试剂配方 | 第17-19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.3.1 E.coli DH5α 感受态细胞的制备与转化（需做阴性对照） | 第19页 |
| 2.3.2 B. subtilis感受态细胞的制备与转化（需做阴性对照） | 第19页 |
| 2.3.3 引物设计 | 第19-20页 |
| 2.3.4 质粒的构建 | 第20-21页 |
| 2.3.5 重组枯草芽孢杆菌的构建 | 第21页 |
| 2.3.6 目的蛋白的与表达与纯化 | 第21-22页 |
| 2.3.7 聚丙烯酰氨凝胶电泳检测（SDS-PAGE） | 第22页 |
| 2.3.8 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第22页 |
| 2.3.9 酶活测定及产物低聚乳果糖的鉴定 | 第22页 |
| 2.3.10 果聚糖蔗糖酶酶学性质研究 | 第22-23页 |
| 2.3.11 合成低聚乳果糖反应条件研究 | 第23页 |
| 2.3.12 发酵产果聚糖蔗糖酶条件的研究 | 第23-24页 |
| 3 结果与讨论 | 第24-43页 |
| 3.1 目的基因的克隆与重组质粒的构建 | 第24-25页 |
| 3.1.1 双启动子质粒 | 第24-25页 |
| 3.1.2 单启动子质粒 | 第25页 |
| 3.2 重组菌株的构建与发酵酶活的比较 | 第25-27页 |
| 3.2.1 菌株的构建 | 第25-26页 |
| 3.2.2 低聚乳果糖产物的鉴定 | 第26-27页 |
| 3.2.3 发酵酶活的比较 | 第27页 |
| 3.3 重组果聚糖蔗糖酶的表达与分离纯化 | 第27-28页 |
| 3.4 重组果聚糖蔗糖酶的酶学性质 | 第28-31页 |
| 3.4.1 温度及温度稳定性 | 第28-29页 |
| 3.4.2 pH及pH稳定性 | 第29-31页 |
| 3.4.3 金属离子对酶活的影响 | 第31页 |
| 3.5 重组果聚糖蔗糖酶合成低聚乳果糖的条件 | 第31-35页 |
| 3.5.1 加酶量对低聚乳果糖合成的影响 | 第31-32页 |
| 3.5.2 底物比例对低聚乳果糖合成的影响 | 第32-33页 |
| 3.5.3 底物浓度对低聚乳果糖合成的影响 | 第33-34页 |
| 3.5.4 反应进程 | 第34-35页 |
| 3.6 重组枯草芽孢杆菌发酵条件的优化 | 第35-43页 |
| 3.6.1 培养基组分对发酵产果聚糖蔗糖酶的影响 | 第35-39页 |
| 3.6.2 培养条件对发酵产果聚糖蔗糖酶的影响 | 第39-41页 |
| 3.6.3 发酵过程曲线 | 第41-43页 |
| 主要结论与展望 | 第43-45页 |
| 主要结论 | 第43页 |
| 展望 | 第43-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-54页 |
| 附录：作者在攻读硕士期间发表论文情况 | 第54页 |
