维生素K2高产菌株的选育及其生物合成相关基因表达丰度的研究
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 致谢 | 第9-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-23页 |
| ·MK 研究进展 | 第15-17页 |
| ·MK 的认知历史 | 第15-16页 |
| ·MK 的生理功能 | 第16-17页 |
| ·MK 的经典作用——促凝血作用 | 第16页 |
| ·MK 可预防骨质疏松症 | 第16-17页 |
| ·MK 的抗肝癌作用 | 第17页 |
| ·原生质体融合技术概况 | 第17-21页 |
| ·亲本菌株的遗传标记 | 第18-19页 |
| ·原生质体制备与再生 | 第19-20页 |
| ·电融合技术 | 第20-21页 |
| ·课题的研究内容、目的和意义 | 第21-23页 |
| ·研究内容 | 第21页 |
| ·目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 高产 MK 菌株的诱变和筛选 | 第23-34页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·菌株 | 第23页 |
| ·主要培养基 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·培养方法 | 第23-24页 |
| ·斜面培养 | 第23-24页 |
| ·种子培养 | 第24页 |
| ·紫外诱变 | 第24页 |
| ·菌悬液的制备 | 第24页 |
| ·诱变处理 | 第24页 |
| ·亚硝基弧诱变 | 第24-25页 |
| ·诱变菌株的初筛和复筛 | 第25页 |
| ·遗传稳定性试验 | 第25页 |
| ·MK 的提取和测定 | 第25页 |
| ·突变菌株产 MK 液体发酵条件的优化 | 第25页 |
| ·结果与讨论 | 第25-33页 |
| ·BS-5 菌的生长曲线 | 第25-26页 |
| ·紫外诱变结果 | 第26-27页 |
| ·NTG 诱变结果 | 第27-28页 |
| ·诱变后菌株 MK 产量的比较 | 第28-29页 |
| ·菌株 BS-53 产 MK 能力遗传稳定性分析 | 第29页 |
| ·BS-53 产 MK 液体发酵成分的确定 | 第29-33页 |
| ·不同碳源对 MK 产量的影响 | 第29-30页 |
| ·碳源浓度的确定 | 第30页 |
| ·不同氮源对 MK 产量的影响 | 第30-31页 |
| ·氮源浓度的确定 | 第31-32页 |
| ·磷源对 MK 产量的影响 | 第32页 |
| ·无机盐组成对 MK 产量的影响 | 第32-33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 原生质体电融合选育 MK 高产菌株 | 第34-52页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·菌种 | 第34页 |
| ·主要培养基 | 第34-35页 |
| ·主要溶液 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·亲株生长曲线的测定 | 第35-36页 |
| ·原生质体制备 | 第36页 |
| ·双亲本原生质体灭活 | 第36-37页 |
| ·灭活原生质体电融合 | 第37页 |
| ·融合子的检出及 DNA 含量的测定 | 第37页 |
| ·融合子的复筛 | 第37页 |
| ·融合子的遗传稳定性 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-49页 |
| ·菌株的生长曲线 | 第37-38页 |
| ·青霉素预处理对亲株生长的影响 | 第38-39页 |
| ·两亲本原生质体制备 | 第39-46页 |
| ·酶的作用浓度 | 第40-41页 |
| ·酶的作用时间 | 第41-42页 |
| ·酶的最适温度 | 第42-43页 |
| ·酶作用的最适 pH 值 | 第43页 |
| ·同步培养对原生质体形成率的影响 | 第43-44页 |
| ·渗透压稳定剂对原生质体再生率的影响 | 第44-45页 |
| ·亲本菌株原生质体制备与再生最佳条件的综合实验 | 第45-46页 |
| ·亲本原生质体灭活条件的选择 | 第46-47页 |
| ·亲本原生质体电融合条件的确定 | 第47-48页 |
| ·融合子的检出及 DNA 含量的测定 | 第48-49页 |
| ·融合子的检出 | 第48页 |
| ·融合子 DNA 含量的测定 | 第48-49页 |
| ·融合子发酵性能试验 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| ·菌龄对原生质体制备的影响 | 第49-50页 |
| ·青霉素预处理对原生质体制备的影响 | 第50页 |
| ·灭活原生质体的讨论 | 第50页 |
| ·电融合过程的讨论 | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 MK 合成相关基因表达丰度的研究 | 第52-61页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·实验菌株 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·主要培养基 | 第52-53页 |
| ·培养方法 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-55页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第53-54页 |
| ·反转录反应 | 第54页 |
| ·PCR 扩增 | 第54-55页 |
| ·结果和分析 | 第55-60页 |
| ·RNA 浓度的测定与分析 | 第55-56页 |
| ·menD 基因的表达丰度分析 | 第56-57页 |
| ·menB 基因的表达丰度分析 | 第57-59页 |
| ·menA 基因表达丰度分析 | 第59-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 结论和展望 | 第61-63页 |
| ·结论 | 第61-62页 |
| ·展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第70-71页 |
