| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| ·生物法合成1,3-丙二醇 | 第8-11页 |
| ·1,3-丙二醇合成菌 | 第8页 |
| ·微生物法转化甘油生成1,3-丙二醇 | 第8-10页 |
| ·甘油脱水酶 | 第10-11页 |
| ·生物法合成1,3-丙二醇过程中CNCbl 的添加 | 第11页 |
| ·维生素B_(12) (钴胺素)的生物合成 | 第11-12页 |
| ·维生素B_(12) 概述 | 第11-12页 |
| ·AdoCbl 的生物合成 | 第12页 |
| ·典型的依赖维生素B_(12) 的反应 | 第12-13页 |
| ·乙酰-CoA 的合成 | 第13页 |
| ·产甲烷古细菌的甲基转移 | 第13页 |
| ·核苷酸还原酶 | 第13页 |
| ·肠道细菌中依赖维生素B_(12) 的发酵过程 | 第13页 |
| ·AdoCbl 生物合成过程中的关键步骤 | 第13-15页 |
| ·氨基乙酰丙酸合成酶 | 第13-14页 |
| ·尿卟啉原Ⅲ甲基转移酶 | 第14页 |
| ·钴胺素腺苷转移酶(ACA) | 第14-15页 |
| ·立题背景 | 第15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-22页 |
| ·试验材料 | 第16-17页 |
| ·主要试验仪器 | 第16页 |
| ·工具酶与试剂 | 第16页 |
| ·菌株与质粒 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16-17页 |
| ·试验方法 | 第17-22页 |
| ·培养方法 | 第17页 |
| ·常规分子实验方法 | 第17页 |
| ·感受态E.coli 的制备 | 第17页 |
| ·感受态E.coli 的转化 | 第17-18页 |
| ·原核生物染色体的提取 | 第18页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第18页 |
| ·卟啉类物质的定性检测 | 第18页 |
| ·1,3-丙二醇的检测 | 第18页 |
| ·腺苷转移酶的分析 | 第18页 |
| ·AdoCbl 合成菌的筛选 | 第18-19页 |
| ·16S rRNA 序列的测定 | 第19页 |
| ·重组菌E. coli JM109(pUC18-tac-cobA-tac-hemA)的构建 | 第19-20页 |
| ·重组菌E. coli JM109(pUC18-tac-btuR-tac-yciK)的构建 | 第20-21页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第21页 |
| ·微生物的生理生化反应 | 第21-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-37页 |
| ·AdoCbl 产生菌的筛选 | 第22-24页 |
| ·土样的分离培养 | 第22页 |
| ·AdoCbl 合成能力的初步鉴定 | 第22页 |
| ·形态学特征 | 第22-23页 |
| ·A24 的生理生化反应 | 第23-24页 |
| ·A24 16S rRNA 序列同源性分析 | 第24页 |
| ·cobA 和hemA 的克隆表达及对合成1,3-丙二醇的影响 | 第24-30页 |
| ·cobA 和hemA 基因的扩增 | 第25页 |
| ·重组质粒pUC18-tac-cobA-tac-hemA 的构建 | 第25-27页 |
| ·卟啉类物质的定性检测 | 第27-28页 |
| ·重组质粒pUC18-tac-cobA-tac-hemA 与pEtac-dhaB-tac-yqhD 的共转化. | 第28页 |
| ·重组质粒pUC18-tac-cobA-tac-hemA 在大肠杆菌中的表达 | 第28-29页 |
| ·重组大肠杆菌初步发酵实验 | 第29-30页 |
| ·CNCbl 转化为AdoCbl 关键基因的表达与鉴定 | 第30-35页 |
| ·基因btuR 和yciK 的扩增 | 第30页 |
| ·重组质粒pUC18-tac-btuR-tac-yciK 的构建 | 第30-32页 |
| ·重组质粒pUC18-tac-btuR-tac-yciK 的RT-PCR 验证 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pUC18-tac-btuR-tac-yciK 在大肠杆菌中的高效表达 | 第33页 |
| ·腺苷转移酶分析 | 第33-34页 |
| ·重组菌的进一步验证 | 第34-35页 |
| ·主要结论 | 第35-36页 |
| ·课题展望 | 第36-37页 |
| 致谢 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-45页 |
| 附录： 硕士期间发表论文 | 第45页 |
