| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-18页 |
| 1.1 透明质酸 | 第9-11页 |
| 1.1.1 透明质酸的发现及特征 | 第9页 |
| 1.1.2 透明质酸的生产方法 | 第9-10页 |
| 1.1.3 链球菌生产HA | 第10-11页 |
| 1.2 兽疫链球菌 | 第11-12页 |
| 1.2.1 兽疫链球菌特性 | 第11页 |
| 1.2.2 兽疫链球菌的HA的合成途径 | 第11页 |
| 1.2.3 兽疫链球菌生产HA的发酵条件 | 第11-12页 |
| 1.2.4 兽疫链球菌生产HA的发酵现状 | 第12页 |
| 1.3 兽疫链球菌遗传信息研究现状 | 第12-13页 |
| 1.3.1 基因敲除系统 | 第12-13页 |
| 1.3.2 基因表达系统 | 第13页 |
| 1.4 兽疫链球菌以蔗糖为底物的代谢 | 第13-17页 |
| 1.4.1 磷酸转移酶系统(PTS) | 第13-14页 |
| 1.4.2 蔗糖的特性及蔗糖转运系统 | 第14-15页 |
| 1.4.3 兽疫链球菌蔗糖代谢图谱 | 第15-16页 |
| 1.4.4 兽疫链球菌ATCC39920蔗糖代谢操纵子分析 | 第16-17页 |
| 1.5 本论文研究的思路 | 第17-18页 |
| 1.5.1 本论文研究的意义及背景 | 第17页 |
| 1.5.2 本论文研究的内容 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-24页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.2 工具酶、抗生素及相关试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 培养基 | 第21-23页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-45页 |
| 2.2.1 兽疫链球菌(S. zooepidemicus ATCC39920)基因组DNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.3 温敏型自杀载体pSET4s和pSET4s::sacB的介绍 | 第25页 |
| 2.2.4 pSET4s::sacB::scrALR敲除载体的构建 | 第25-31页 |
| 2.2.5 敲除载体pSET4s::sacB::scrBLR的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.6 敲除载体pSET4s::scrBL-cm-scrBR的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.7 敲除载体pSET4s::sacB:fruALR的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.8 敲除载体pSET4s::sacB:fruKLR的构建 | 第34页 |
| 2.2.9 敲除载体pSET4s::sacB::scrKLR的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.10 表达载体pLH243的简介 | 第35-36页 |
| 2.2.11 表达载体pLH243::P_(scr)::scrA的构建 | 第36页 |
| 2.2.12 表达载体pLH243::P_(scr)::scrB的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.13 兽疫链球菌感受态的制备 | 第37页 |
| 2.2.14 兽疫链球菌的电转化 | 第37-38页 |
| 2.2.15 基因敲除菌株的筛选 | 第38-41页 |
| 2.2.16 兽疫链球菌RNA的提取及RT-PCR | 第41-43页 |
| 2.2.17 兽疫链球菌在CDM2固体培养基中的生长分析 | 第43页 |
| 2.2.18 兽疫链球菌代谢产物的分析测定 | 第43-45页 |
| 3 结果与讨论 | 第45-71页 |
| 3.1 与蔗糖代谢相关基因的生物学信息及在染色体上的位置 | 第45页 |
| 3.2 兽疫链球菌ATCC39920基因组的提取 | 第45-46页 |
| 3.3 基因敲除 | 第46-53页 |
| 3.3.1 敲除载体的构建 | 第46-53页 |
| 3.4 基因敲除菌株的筛选 | 第53-57页 |
| 3.4.1 scrA基因的敲除 | 第53页 |
| 3.4.2 scrB基因的敲除 | 第53-54页 |
| 3.4.3 scrB/scrA双基因的敲除 | 第54-55页 |
| 3.4.4 fruA基因的敲除 | 第55页 |
| 3.4.5 fruK基因的敲除 | 第55-56页 |
| 3.4.6 scrK基因的敲除 | 第56-57页 |
| 3.5 基因过表达 | 第57-59页 |
| 3.5.1 过表达载体pLH243::P_(scr)-scrA的构建 | 第57-58页 |
| 3.5.2 过表达载体pLH243::P_(scr)-scrB的构建 | 第58-59页 |
| 3.5.3 同源过表达菌株ScrA/OP与ScrB/OP的构建 | 第59页 |
| 3.5.4 突变株△fruA-ScrB/OP和△fruK-ScrB/OP的构建 | 第59页 |
| 3.6 scrA与scrB单、双基因敲除菌株与野生型菌株差异分析 | 第59-61页 |
| 3.6.1 scrA与scrB敲除菌株与野生型菌株表型分析 | 第59-60页 |
| 3.6.2 scrA与scrB敲除菌株与野生型菌株摇瓶生长量分析 | 第60-61页 |
| 3.7 ScrA/OP与ScrB/OP与WT差异分析 | 第61-63页 |
| 3.7.1 ScrA/OP与ScrB/OP与WT菌株表型分析 | 第61-62页 |
| 3.7.2 ScrA/OP与ScrB/OP与WT菌株生物量分析 | 第62页 |
| 3.7.3 ScrA/OP与ScrB/OP与WT菌株HA产量分析 | 第62-63页 |
| 3.8 fruA、fruK与scrK基因敲除菌株和野生型菌株差异分析 | 第63-64页 |
| 3.8.1 fruA、fruK与scrK基因敲除菌株和野生型菌株生物量分析 | 第63-64页 |
| 3.8.2 fruA、fruK与scrK基因敲除菌株和野生型菌株HA产量分析 | 第64页 |
| 3.9 scrK基因转录分析 | 第64-65页 |
| 3.9.1 WT总RNA提取 | 第65页 |
| 3.9.2 scrK基因转录情况的检测 | 第65页 |
| 3.10 野生型菌株和hasE缺失菌株表型分析 | 第65-66页 |
| 3.11 野生型菌株和突变株代谢差异分析 | 第66-71页 |
| 3.11.1 生长差异分析 | 第66-67页 |
| 3.11.2 代谢产物差异分析 | 第67-69页 |
| 3.11.3 耗糖速率分析 | 第69-71页 |
| 4 结论 | 第71-72页 |
| 5 展望 | 第72-73页 |
| 6 参考文献 | 第73-80页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第80-81页 |
| 8 致谢 | 第81页 |
