| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第11-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1.1 苏云金芽孢杆菌蛋白及其研究进展 | 第13-22页 |
| 1.1.1 苏云金芽孢杆菌蛋白 | 第13页 |
| 1.1.2 苏云金芽孢杆菌蛋白的分类 | 第13-14页 |
| 1.1.3 苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Cry1Ac | 第14页 |
| 1.1.4 苏云金芽孢杆菌蛋白的检测意义 | 第14页 |
| 1.1.5 苏云金芽孢杆菌蛋白的检测技术 | 第14-22页 |
| 1.2 RBL细胞传感器的研究进展 | 第22-28页 |
| 1.2.1 细胞传感器概述 | 第22页 |
| 1.2.2 细胞传感器的工作原理 | 第22-23页 |
| 1.2.3 细胞传感器的分类 | 第23页 |
| 1.2.4 RBL细胞传感器概述及其工作原理 | 第23-25页 |
| 1.2.5 RBL细胞传感器规模化应用存在的问题 | 第25-26页 |
| 1.2.6 纳米抗体 | 第26页 |
| 1.2.7 IgE嵌合抗体 | 第26-28页 |
| 1.3 主要研究内容及意义 | 第28-29页 |
| 1.3.1 主要研究内容 | 第28页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第28-29页 |
| 第2章 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体真核表达载体的构建及其表达 | 第29-53页 |
| 2.1 材料与方法 | 第29-41页 |
| 2.1.1 主要实验材料 | 第29-30页 |
| 2.1.2 主要设备 | 第30-31页 |
| 2.1.3 主要溶液及培养基的配置 | 第31-32页 |
| 2.1.4 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体基因(N72-F-Fc)的优化设计及合成 | 第32-35页 |
| 2.1.5 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体真核表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.1.6 pPIC9K-N72-F-Fc真核表达载体的单酶切、双酶切验证 | 第36页 |
| 2.1.7 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 2.1.8 pPIC9K-N72-F-Fc质粒至毕赤酵母GS115感受态细胞的电转化 | 第37-39页 |
| 2.1.9 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体的真核表达、纯化及其活性鉴定 | 第39-41页 |
| 2.2 实验结果 | 第41-50页 |
| 2.2.1 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体基因的设计 | 第41-42页 |
| 2.2.2 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体基因的优化 | 第42-45页 |
| 2.2.3 pPIC9K-N72-F-Fc真核表达载体的单酶切、双酶切验证 | 第45页 |
| 2.2.4 毕赤酵母GS115His+转化子甲醇利用表型的鉴定 | 第45-46页 |
| 2.2.5 毕赤酵母GS115His+转化子G418遗传霉素多拷贝的筛选 | 第46-47页 |
| 2.2.6 GS115His+转化子基因组PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 2.2.7 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体的真核表达 | 第48-49页 |
| 2.2.8 DAS-ELISA鉴定抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体的活性 | 第49-50页 |
| 2.3 讨论 | 第50-51页 |
| 2.4 小结 | 第51-53页 |
| 第3章 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体的原核表达 | 第53-88页 |
| 3.1 材料与方法 | 第53-69页 |
| 3.1.1 主要实验材料 | 第53-54页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第54页 |
| 3.1.3 主要溶液及培养基的配置 | 第54-55页 |
| 3.1.4 pET25b-N72-F-Fc表达载体的构建 | 第55-59页 |
| 3.1.5 pET25b-Fc表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 3.1.6 pET25b-N72-R-Fc表达载体的构建 | 第60-63页 |
| 3.1.7 pET25b-N24-R-Fc表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 3.1.8 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体(N72-F-Fc)的原核表达与纯化 | 第64-65页 |
| 3.1.9 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体(N72-R-Fc)的原核表达与纯化 | 第65页 |
| 3.1.10 Fc片段的原核表达与纯化 | 第65页 |
| 3.1.11 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体(N24-R-Fc)的原核表达与纯化 | 第65页 |
| 3.1.12 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体免疫分析性能的鉴定 | 第65-67页 |
| 3.1.13 检测Cry1Ac的DAS-ELISA标准曲线的建立 | 第67-68页 |
| 3.1.14 N24-R-Fc经Cry1Ac抗原诱导RBL-2H3细胞活化脱颗粒 | 第68-69页 |
| 3.2 实验结果 | 第69-85页 |
| 3.2.1 pET25b-N72-F-Fc、pET25b-Fc、pET25b-N72-R-Fc、pET25b-N24-R-Fc表达载体的构建 | 第69-73页 |
| 3.2.2 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体的原核表达与纯化 | 第73-79页 |
| 3.2.3 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体免疫分析性能的鉴定 | 第79-82页 |
| 3.2.4 检测Cry1Ac的DAS-ELISA标准曲线的建立 | 第82-83页 |
| 3.2.5 N24-R-Fc经Cry1Ac抗原诱导RBL-2H3细胞活化脱颗粒 | 第83-85页 |
| 3.3 讨论 | 第85-86页 |
| 3.3.1 IgE嵌合抗体的原核表达 | 第85页 |
| 3.3.2 RBL细胞传感器核心识别元件IgE分子的免疫学分析性能 | 第85-86页 |
| 3.4 小结 | 第86-88页 |
| 第4章 抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体在非标记电化学阻抗免疫传感器中的应用 | 第88-99页 |
| 4.1 材料与方法 | 第88-90页 |
| 4.1.1 主要实验材料 | 第88-89页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第89页 |
| 4.1.3 主要溶液的配置 | 第89页 |
| 4.1.4 Cry1Ac阻抗免疫传感器的工作原理 | 第89页 |
| 4.1.5 N24-R-Fc作为Cry1Ac抗原识别元件在Cry1Ac阻抗免疫传感器中的分析性能 | 第89-90页 |
| 4.1.6 8A8作为Cry1Ac抗原识别元件在Cry1Ac阻抗免疫传感器中的分析性能 | 第90页 |
| 4.1.7 Cry1Ac阻抗免疫传感器的特异性分析 | 第90页 |
| 4.1.8 样品加标回收实验 | 第90页 |
| 4.2 实验结果 | 第90-97页 |
| 4.2.1 基于N24-R-Fc、8A8的Cry1Ac阻抗免疫传感器的循环伏安表征 | 第90-92页 |
| 4.2.2 基于N24-R-Fc、8A8的Cry1Ac阻抗免疫传感器的阻抗谱表征 | 第92-93页 |
| 4.2.3 N24-R-Fc、8A8作为Cry1Ac抗原识别元件在Cry1Ac阻抗免疫传感器中的分析性能 | 第93-96页 |
| 4.2.4 Cry1Ac阻抗免疫传感器的交叉反应 | 第96-97页 |
| 4.2.5 样品加标回收实验 | 第97页 |
| 4.3 讨论 | 第97-98页 |
| 4.4 小结 | 第98-99页 |
| 第5章 结论与展望 | 第99-101页 |
| 5.1 主要研究结果与结论 | 第99-100页 |
| 5.2 进一步工作的方向 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 附录 | 第110-114页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第114页 |
